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ELISA試劑盒血清樣本注意事項(xiàng)以及應(yīng)用條件

更新時(shí)間:2016-09-06   點(diǎn)擊次數(shù):2279次

   ELISA試劑盒測(cè)定的標(biāo)本十分廣泛,體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標(biāo)本以測(cè)定其中某種抗體或抗原成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測(cè)定(如血清、尿液),有些則需經(jīng)預(yù)處理(如糞便和某些分泌物)。
  大部分ELISA試劑盒檢測(cè)均以血清為標(biāo)本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均同等于血清。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑,而血清標(biāo)本只要待血清自然凝固、xue塊收縮后即可取得。除特殊情況外,在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中均以血清作為檢測(cè)標(biāo)本。
    在ELISA試劑盒中血漿和血清可同等應(yīng)用。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集,應(yīng)注意避免溶血,紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP為標(biāo)記的ELISA試劑盒測(cè)定中,溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。
   血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)。如在冰箱中保存過(guò)久,其中的可發(fā)生聚合,在間接法ELISA試劑盒中可使本底加深。一般說(shuō)來(lái),在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃,超過(guò)一周測(cè)定的需低溫冰存。凍結(jié)血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩?;鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過(guò)濾,澄清后再檢測(cè)。
   反復(fù)凍融會(huì)使抗體效價(jià)跌落,所以測(cè)抗體的血清標(biāo)本如,宜少量分裝冰存。保存血清自采集時(shí)就應(yīng)注意無(wú)菌操作,也可加入適當(dāng)防腐劑。加標(biāo)本一般用微量加樣器,按規(guī)定的量加入板孔中。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴,以免發(fā)生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測(cè)定(如間接法ELISA試劑盒)需用稀釋的血清,可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液,再在其中加入血清標(biāo)本,然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物應(yīng)用液時(shí)可用定量多道加液器,使加液過(guò)程迅速完成。

                                    

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