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如何挑選BIM試劑盒的固相載體、OD值?

更新時(shí)間:2016-11-10   點(diǎn)擊次數(shù):1487次

  一般底物效果時(shí)刻,以10-30分鐘為宜。底物運(yùn)用液有必要新鮮,尤其是H2O2在臨用前參加。
BIM試劑盒進(jìn)行各項(xiàng)試驗(yàn)條件的挑選是很首要的,其間包含:
固相載體的挑選:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。
其方法可所以凹孔平板、試管、珠粒等?,F(xiàn)在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。
不管何種載體,在運(yùn)用前均可進(jìn)行挑選:用等量抗原包被,在同一試驗(yàn)條件下進(jìn)行反響,查詢其顯色反響是不是均一性,據(jù)此判明其吸附功用是不是超卓。
包被抗體(或抗原)的挑選:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),央求純度要好,吸附時(shí)一般央求PH在9.0~9.6之間。
吸附溫度,時(shí)刻及其蛋白量也有必定影響,一般多選用4℃ 18~24小時(shí)。
蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定:即用不一樣的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相一同,查詢陽性標(biāo)本的OD值。
挑選OD值z(mì)ui大而蛋白量起碼的濃度。
對(duì)于大都蛋白質(zhì)來說一般為1~10μg/ml。
酶符號(hào)抗體作業(yè)濃度的挑選:首先用直接ELISA法進(jìn)行開端效價(jià)的滴定(見酶符號(hào)抗體部份)。
然后再固定其它條件或選用“方陣法”(包被物、待檢樣品的參看品及酶符號(hào)抗體分別為不一樣的稀釋度)在正式試驗(yàn)體系里地滴定其作業(yè)濃度。
酶的底物及供氫體的挑選:對(duì)供氫體的挑選央求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反響,而自身無色。
有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌效果,應(yīng)留心防護(hù)。
有條件者應(yīng)運(yùn)用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是現(xiàn)在較為滿意的供氫體。
底物效果一段時(shí)刻后,應(yīng)參加強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以連續(xù)反響。

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