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恒遠生物:ELISA方法設計的原理根據(jù)是什么?

更新時間:2016-12-27   點擊次數(shù):2603次

      在ELISA的實際應用中,通過不同的設計,具體的方法步驟可有多種。如雙抗體夾心法、間接法、競爭法、雙位點一步法、捕獲法測IgM抗體、應用親和素和生物素的ELISA。在今天的技術內(nèi)容中,上海恒遠生物公司為您詳解ELISA方法設計的原理根據(jù)。


   ELISA以免疫學反應為基礎,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應物,從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。


   應用雙抗體夾心法測定標本水平。用純化的抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入,再與HRP標記的抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。


   TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品的濃度。


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