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ELISA實(shí)驗(yàn)必看~ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的操作要點(diǎn)

更新時(shí)間:2017-05-04   點(diǎn)擊次數(shù):2386次


    ELISA試劑盒應(yīng)嚴(yán)格遵照規(guī)定操作,必能得出準(zhǔn)確的結(jié)果。首先應(yīng)選取的試劑,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。所以ELISA試劑盒的購(gòu)買,試劑質(zhì)量的保證以及實(shí)驗(yàn)前實(shí)驗(yàn)儀器的檢察都是很重要的。

一、標(biāo)本的采集及保存
    1、血清:全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
    2、血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
    3、細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:請(qǐng)1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
    4、樣本處理:血清或血漿標(biāo)本推薦稀釋10,000倍。
    注:以上標(biāo)本置4℃保存應(yīng)小于1周,-20℃或-80℃均應(yīng)密封保存,-20℃不應(yīng)超過1個(gè)月,-80℃不應(yīng)超過2個(gè)月;標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。
    二、試劑的準(zhǔn)備 
按試劑盒說(shuō)明書的要求準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)中需用的試劑. ELISA中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的.自配的緩沖液應(yīng)用pH計(jì)測(cè)量較正.從冰箱中取出的試 驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用.試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存。
三、加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
    四、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
    五、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
    六、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
    七、測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
    講述完了以上ELISA實(shí)驗(yàn)的操作要點(diǎn),可以發(fā)現(xiàn)其實(shí)很多步驟都并不復(fù)雜,重要的是操作的時(shí)候一定要注重細(xì)節(jié),熟能生巧,才可以掌握ELISA實(shí)驗(yàn)的精髓所在。

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