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ELISA試劑盒:溫育可不是你想的那么簡單!

更新時間:2019-09-05   點擊次數(shù):1329次

    溫育是ELISA測定中影響測定勝敗zui為要害的一個要素。也是zui簡略出現(xiàn)問題的一個過程。通常目前國內ELISA產品試劑盒的反應溫育時間為37 ℃ 30分鐘~1小時,進口ELISA試劑盒則通常為37 ℃ 1~2小時才華有較*的結合,低于1小時,或許會影響測定下限。因此,關于溫育,在實踐測定操作中必定要留意以下幾點:

    1.要保證在設定的溫度下有滿意的反應時間。一般來說,加完樣本和/或反應試劑后,將微孔板從室溫拿至水浴箱或溫箱中時,孔內溫度從室溫升至37℃,需求必定的時間,尤其是在室溫比較低以及非水浴的狀態(tài)下,這段升溫時間或許還比較長,而在臨床實驗室中,很少有人留意這個問題,通常是將微孔板一放入溫箱即開端計時,這樣就很簡略構成實踐測定中溫育時間不行,弱陽性樣本測不出來的問題。曾有一地處南邊的血站同行提出了一個問題,就是在每一年的冬天總有那么一個多月的時間,在做HBsAg測定的室內質控中,測定由衛(wèi)生部臨床查驗中心供應的1 ng/ml弱陽性樣本時,總是測不出來,不知原因為何?這或許就與南邊冬天室內溫度較低有關,此時微孔板轉入溫箱后37 ℃溫育時間不行,致使弱陽性樣本測定為陰性。因此,為保證37 ℃下滿意的溫育時間,臨床實驗室可自行確定本實驗室不同季節(jié)(不同室溫下)微孔板從室溫拿至溫箱后需求多長時間孔內溫度才華達到37 ℃,然后恰當延伸板條在溫箱中的放置時間。具體的做法是,用一小溫度計放置板孔反應溶液中測量觀察即可。

    2.溫育溫度的挑選。在有的ELISA試劑盒的闡明書中,指出溫育溫度可有兩種,例如,一種是37 ℃下1小時,另一種則為43 ℃下45分鐘。從免疫測定的抗原抗體反應的實質來看,在較低的溫度下反應較長的時間zui為*。如2~8 ℃下反應24小時。較高的反應溫度,因為分子運動的加憐惜,反應時間縮短,這一點對分子含量較多的強陽性樣本的測定沒有問題,但對分子含量少的弱陽性樣本則有漏檢的或許。因此,咱們主張在臨床ELISA測定中盡量運用較低溫育溫度較長反應時間的條件。

    3.“邊緣效應”的打掃。曾經在運用96孔板的ELISA測定中,常發(fā)現(xiàn)有“邊緣效應”,即外周孔顯色較中心孔深,發(fā)生這種“邊緣效應”的原因或許為 96孔板周孔與中心孔外表或熱力學特征的不同。但有研討證實在溫育中的熱力學梯度或許是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導體,在實驗室的慣例 ELISA測定中,將板從室溫(通常在25 ℃左右)置于37 ℃溫箱,板也升溫時,在外周孔與中心孔之間或許存在一熱力學梯度。因此運用水浴或在將反應溶液參加至板孔中時,將板和溶液均加熱至溫育溫度(如37 ℃),就可以很簡略地打掃“邊緣效應”,而且可進步測定的重復性。

    總而言之,在ELISA測定中,要保證好的測定效果,可選用上述簡略方法來保證溫育條件,即盡量選用水浴,溫育中讓微孔板浮于水面上,或將浸透水的沙布放入一大飯盒中成一濕盒,放于溫箱中,這樣就會因為板條孔底部直接與37 ℃水或濕布的接觸,以及水浴箱或濕盒內的高溫度,而使反應溶液的溫度敏捷與溫室平衡。

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