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ELISA試劑盒:溫育可不是你想的那么簡(jiǎn)單!

更新時(shí)間:2019-09-05   點(diǎn)擊次數(shù):1069次

    溫育是ELISA測(cè)定中影響測(cè)定勝敗zui為要害的一個(gè)要素。也是zui簡(jiǎn)略出現(xiàn)問(wèn)題的一個(gè)過(guò)程。通常目前國(guó)內(nèi)ELISA產(chǎn)品試劑盒的反應(yīng)溫育時(shí)間為37 ℃ 30分鐘~1小時(shí),進(jìn)口ELISA試劑盒則通常為37 ℃ 1~2小時(shí)才華有較*的結(jié)合,低于1小時(shí),或許會(huì)影響測(cè)定下限。因此,關(guān)于溫育,在實(shí)踐測(cè)定操作中必定要留意以下幾點(diǎn):

    1.要保證在設(shè)定的溫度下有滿(mǎn)意的反應(yīng)時(shí)間。一般來(lái)說(shuō),加完樣本和/或反應(yīng)試劑后,將微孔板從室溫拿至水浴箱或溫箱中時(shí),孔內(nèi)溫度從室溫升至37℃,需求必定的時(shí)間,尤其是在室溫比較低以及非水浴的狀態(tài)下,這段升溫時(shí)間或許還比較長(zhǎng),而在臨床實(shí)驗(yàn)室中,很少有人留意這個(gè)問(wèn)題,通常是將微孔板一放入溫箱即開(kāi)端計(jì)時(shí),這樣就很簡(jiǎn)略構(gòu)成實(shí)踐測(cè)定中溫育時(shí)間不行,弱陽(yáng)性樣本測(cè)不出來(lái)的問(wèn)題。曾有一地處南邊的血站同行提出了一個(gè)問(wèn)題,就是在每一年的冬天總有那么一個(gè)多月的時(shí)間,在做HBsAg測(cè)定的室內(nèi)質(zhì)控中,測(cè)定由衛(wèi)生部臨床查驗(yàn)中心供應(yīng)的1 ng/ml弱陽(yáng)性樣本時(shí),總是測(cè)不出來(lái),不知原因?yàn)楹??這或許就與南邊冬天室內(nèi)溫度較低有關(guān),此時(shí)微孔板轉(zhuǎn)入溫箱后37 ℃溫育時(shí)間不行,致使弱陽(yáng)性樣本測(cè)定為陰性。因此,為保證37 ℃下滿(mǎn)意的溫育時(shí)間,臨床實(shí)驗(yàn)室可自行確定本實(shí)驗(yàn)室不同季節(jié)(不同室溫下)微孔板從室溫拿至溫箱后需求多長(zhǎng)時(shí)間孔內(nèi)溫度才華達(dá)到37 ℃,然后恰當(dāng)延伸板條在溫箱中的放置時(shí)間。具體的做法是,用一小溫度計(jì)放置板孔反應(yīng)溶液中測(cè)量觀察即可。

    2.溫育溫度的挑選。在有的ELISA試劑盒的闡明書(shū)中,指出溫育溫度可有兩種,例如,一種是37 ℃下1小時(shí),另一種則為43 ℃下45分鐘。從免疫測(cè)定的抗原抗體反應(yīng)的實(shí)質(zhì)來(lái)看,在較低的溫度下反應(yīng)較長(zhǎng)的時(shí)間zui為*。如2~8 ℃下反應(yīng)24小時(shí)。較高的反應(yīng)溫度,因?yàn)榉肿舆\(yùn)動(dòng)的加憐惜,反應(yīng)時(shí)間縮短,這一點(diǎn)對(duì)分子含量較多的強(qiáng)陽(yáng)性樣本的測(cè)定沒(méi)有問(wèn)題,但對(duì)分子含量少的弱陽(yáng)性樣本則有漏檢的或許。因此,咱們主張?jiān)谂R床ELISA測(cè)定中盡量運(yùn)用較低溫育溫度較長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間的條件。

    3.“邊緣效應(yīng)”的打掃。曾經(jīng)在運(yùn)用96孔板的ELISA測(cè)定中,常發(fā)現(xiàn)有“邊緣效應(yīng)”,即外周孔顯色較中心孔深,發(fā)生這種“邊緣效應(yīng)”的原因或許為 96孔板周孔與中心孔外表或熱力學(xué)特征的不同。但有研討證實(shí)在溫育中的熱力學(xué)梯度或許是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導(dǎo)體,在實(shí)驗(yàn)室的慣例 ELISA測(cè)定中,將板從室溫(通常在25 ℃左右)置于37 ℃溫箱,板也升溫時(shí),在外周孔與中心孔之間或許存在一熱力學(xué)梯度。因此運(yùn)用水浴或在將反應(yīng)溶液參加至板孔中時(shí),將板和溶液均加熱至溫育溫度(如37 ℃),就可以很簡(jiǎn)略地打掃“邊緣效應(yīng)”,而且可進(jìn)步測(cè)定的重復(fù)性。

    總而言之,在ELISA測(cè)定中,要保證好的測(cè)定效果,可選用上述簡(jiǎn)略方法來(lái)保證溫育條件,即盡量選用水浴,溫育中讓微孔板浮于水面上,或?qū)⒔杆纳巢挤湃胍淮箫埡兄谐梢粷窈?,放于溫箱中,這樣就會(huì)因?yàn)榘鍡l孔底部直接與37 ℃水或濕布的接觸,以及水浴箱或濕盒內(nèi)的高溫度,而使反應(yīng)溶液的溫度敏捷與溫室平衡。

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