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ELISA kit操作中的實(shí)驗(yàn)禁忌

更新時(shí)間:2019-10-18   點(diǎn)擊次數(shù):1136次

    酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA) 因其操作簡(jiǎn)單,靈敏度高,特異性好,經(jīng)濟(jì)安全等特點(diǎn)而在臨床上廣泛應(yīng)用,但是由于其操作步驟復(fù)雜,一般包括試劑準(zhǔn)備,樣本收集,加樣,溫育,洗滌,顯色,比色,結(jié)果判定等,其中任何一項(xiàng)操作不當(dāng)都會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生很大影響。因此,必須加強(qiáng)ELISA檢測(cè)的全面質(zhì)量控制,保證其結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。Elisa實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響因素包括檢測(cè)樣品因素、操作因素等。在實(shí)驗(yàn)操作的過(guò)程中有一些技術(shù)要點(diǎn),在這里,上海恒遠(yuǎn)生物為大家分享操作Elisa kit的實(shí)驗(yàn)禁忌---(僅供參考): 

    1.加樣后及時(shí)放人孵箱,標(biāo)本較多時(shí),要分批操作。按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間,防止孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。 

    2.實(shí)驗(yàn)時(shí)必須戴手套,穿工作衣,嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度。 

    3.剩余樣品及廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘,或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。 

    4.同批號(hào)試劑組分不得混用。 

    5.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。 

    6.每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔,該孔不加任何試劑,只是后加底物溶液及2N H2SO4。測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)OD值至零。 

    7.要確保微量加樣器的準(zhǔn)確性,可以使用蒸餾水和電子天平進(jìn)行確定(由于蒸餾水不含雜質(zhì),溫度環(huán)境為20%左右時(shí),lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0.2g)每一把微量加樣器都應(yīng)該將其zui高量程和低量程進(jìn)行確定。
 
    8.在使用微量加樣器時(shí),吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭,即使吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液。 

    9.吸取液體時(shí)速度不易太快,以免產(chǎn)生氣泡,吸取的量不夠準(zhǔn)確。 

    10.手工洗板時(shí)每次加入洗滌液后。應(yīng)靜置15~30s,不要將一個(gè)酶標(biāo)孑L中的洗滌液濺入另一酶標(biāo)孔中,防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干。 

    11.底物為TMB,避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃流酸具有腐蝕性,應(yīng)盡量避免接觸皮膚。 

    ELISA檢測(cè)操作步驟復(fù)雜,可能會(huì)影響測(cè)定結(jié)果的因素較多,分布在測(cè)定操作的各個(gè)步驟中,因此必須加強(qiáng)各環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制,才能得到準(zhǔn)確可靠的檢測(cè)結(jié)果。

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