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如何制備細(xì)胞懸液呢?

更新時(shí)間:2020-01-16   點(diǎn)擊次數(shù):15427次

    細(xì)胞懸液是指single cell suspension。一般就是指把貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞消化吹打以后形成的懸液,一般會(huì)吹打多次,使粘連的細(xì)胞都分開。當(dāng)然,本身是懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞的話,就不用消化了。

    制備細(xì)胞懸液

    (1)用75%酒精棉球消毒超凈工作臺(tái)臺(tái)面,然后用75%酒精棉球消毒雙手及暴露部位;

    (2)用75%酒精棉球消毒各培養(yǎng)用液的瓶蓋以及培養(yǎng)瓶瓶蓋部位,并在酒精燈外焰上方一過,擰開瓶蓋,將瓶口再在酒精燈外焰上方一過后,擰上瓶蓋,但不要擰緊,以便下步操作;?

    (3)輕輕將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液倒入燒杯中,注意不要讓瓶口碰到燒杯,不要讓液體濺出;

    (4)吸取PE液3ml加入瓶?jī)?nèi),加入時(shí)注意從側(cè)面加入而不能直接沖細(xì)胞貼壁處,避免造成細(xì)胞脫壁,然后蓋上蓋子,平放輕搖40下,輕輕倒出,要求倒干凈;

    (5)加入0.3ml的0.25%胰蛋白酶液,加入時(shí)直沖細(xì)胞貼壁處,平放輕搖,使酶液漫過整個(gè)瓶底部,一分鐘之內(nèi)將培養(yǎng)瓶放在倒置顯微鏡臺(tái)上進(jìn)行觀察,可發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)漸漸回縮,細(xì)胞間隙增大,細(xì)胞慢慢變圓,用手掌拍打瓶底和瓶側(cè),使細(xì)胞從瓶壁上脫落下來并分散,呈懸浮狀;

    (6)立即加入5mlMEM+10%小牛血清,用吸管向瓶壁輕輕吹吸幾次,從培養(yǎng)瓶底部一邊開始到另一邊結(jié)束,以確保所有底部都被吹到,使細(xì)胞全部從瓶壁脫落并形成均勻的細(xì)胞懸液;

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