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解析凍存細胞如何復蘇

更新時間:2020-05-26   點擊次數(shù):2229次

    在實際操作中,凍存細胞要進行復蘇,再培養(yǎng)傳代。凍存細胞應(yīng)如何復蘇呢?復蘇細胞一般采用快速融化法。以保證細胞外結(jié)晶快速融化,以避免慢速融化水分滲入細胞內(nèi),再次形成胞內(nèi)結(jié)晶損傷細胞。

    細胞復蘇的主要操作步驟
   (1)佩戴眼鏡和手套,從液氮罐中取出安瓿或冷凍管。
   (2)迅速放入 38℃水浴中,并不時搖動,在 1 分鐘內(nèi)使其*融化,然后在無菌下取出細胞。         

   (3)在 1000r/min速度下離心 5~10 分鐘,棄去上層液,加入適量培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)瓶中,接種濃度 1×109/L,置 37℃溫箱靜置培養(yǎng),次日 更換一次培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng),觀察生長情況。若細胞密度較高,及時傳代。或無需離心直接將細胞加入瓶中,并加入培養(yǎng)基貼壁培養(yǎng) 12~24 小時 后,充去上清,換入新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

    細胞復蘇的注意事項
在細胞復蘇操作時,應(yīng)注意融化凍存細胞速度要快,可不時搖動安瓿或冷凍管,使之盡快通過易受損的溫度段(-5~0℃)。這樣復蘇的凍 存細胞存活率高,生長及形態(tài)良好。然而,由于凍存的細胞還受其他因素的影響,有時也會有部分細胞死亡。此時,可將不貼壁、飄浮在培養(yǎng)液上(已死亡)的細胞輕輕倒掉,再補以適量的新培養(yǎng)液,也會獲得較為滿意的結(jié)果。

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