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解析凍存細(xì)胞如何復(fù)蘇

更新時(shí)間:2020-05-26   點(diǎn)擊次數(shù):1916次

    在實(shí)際操作中,凍存細(xì)胞要進(jìn)行復(fù)蘇,再培養(yǎng)傳代。凍存細(xì)胞應(yīng)如何復(fù)蘇呢?復(fù)蘇細(xì)胞一般采用快速融化法。以保證細(xì)胞外結(jié)晶快速融化,以避免慢速融化水分滲入細(xì)胞內(nèi),再次形成胞內(nèi)結(jié)晶損傷細(xì)胞。

    細(xì)胞復(fù)蘇的主要操作步驟
   (1)佩戴眼鏡和手套,從液氮罐中取出安瓿或冷凍管。
   (2)迅速放入 38℃水浴中,并不時(shí)搖動(dòng),在 1 分鐘內(nèi)使其*融化,然后在無(wú)菌下取出細(xì)胞。         

   (3)在 1000r/min速度下離心 5~10 分鐘,棄去上層液,加入適量培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)瓶中,接種濃度 1×109/L,置 37℃溫箱靜置培養(yǎng),次日 更換一次培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng),觀察生長(zhǎng)情況。若細(xì)胞密度較高,及時(shí)傳代?;驘o(wú)需離心直接將細(xì)胞加入瓶中,并加入培養(yǎng)基貼壁培養(yǎng) 12~24 小時(shí) 后,充去上清,換入新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

    細(xì)胞復(fù)蘇的注意事項(xiàng)
在細(xì)胞復(fù)蘇操作時(shí),應(yīng)注意融化凍存細(xì)胞速度要快,可不時(shí)搖動(dòng)安瓿或冷凍管,使之盡快通過(guò)易受損的溫度段(-5~0℃)。這樣復(fù)蘇的凍 存細(xì)胞存活率高,生長(zhǎng)及形態(tài)良好。然而,由于凍存的細(xì)胞還受其他因素的影響,有時(shí)也會(huì)有部分細(xì)胞死亡。此時(shí),可將不貼壁、飄浮在培養(yǎng)液上(已死亡)的細(xì)胞輕輕倒掉,再補(bǔ)以適量的新培養(yǎng)液,也會(huì)獲得較為滿意的結(jié)果。

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