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超級干貨:如何選擇抗體

更新時(shí)間:2020-07-29   點(diǎn)擊次數(shù):1601次

抗體(英語:antibody),(免疫球蛋白不僅僅只是抗體)是一種由漿細(xì)胞(效應(yīng)B細(xì)胞)分泌,被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細(xì)菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì),僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動物的血液等體液中,及其B細(xì)胞的細(xì)胞膜表面??贵w能識別特定外來物的一個(gè)*特征,該外來目標(biāo)被稱為抗原。

1. 一抗選擇

(1)確定抗體的名字,注意中英文名字、別名、亞型等信息。

(2)確定實(shí)驗(yàn)樣本的種屬,Human,Mouse,Rat等。我們的抗體說明書都列出該抗體驗(yàn)證過的適用物種,可根據(jù)說明書列出已驗(yàn)證的種屬來選擇適合你實(shí)驗(yàn)需要的抗體。

(3)確定您的實(shí)驗(yàn)類型,Elisa,WB,IHC,ICC,或者是FACS。biorbyt的每種抗體說明書都會列出抗體經(jīng)驗(yàn)證過適用的實(shí)驗(yàn)類型,如果抗體說明書沒有提及的應(yīng)用類型,并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類型,而僅是說明尚未經(jīng)過此種實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

(4)單多克隆抗體的選擇。一般單克隆抗體特異性強(qiáng),但親和力相對小,檢測抗原靈敏度相對就低;而多克隆抗體特異性稍弱,但抗體的親和力強(qiáng),靈敏度高,但易出現(xiàn)非特異性染色(可以通過封閉等避免)。

(5)樣本抗原蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)。了解樣本抗原蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于選擇合適的抗體,待測樣本蛋白的結(jié)構(gòu)域和樣本在提取和處理過程中是否會變性,蛋白空間構(gòu)象的改變,會影響抗體的免疫親和反應(yīng)。

2. 二抗選擇

(1)種屬來源。主要根據(jù)一抗種屬來源而決定二抗來源,如一抗是小鼠來源,那二抗就買抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。

(2)標(biāo)記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標(biāo)記物。免疫組化,WB二抗主要選擇HRP,Biotin標(biāo)記的二抗,而免疫熒光染色可按實(shí)驗(yàn)需要選擇不同熒光素標(biāo)記的二抗,如FITC、Cy3、PE等。
 

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