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超級(jí)干貨:如何選擇抗體

更新時(shí)間:2020-07-29   點(diǎn)擊次數(shù):1210次

抗體(英語(yǔ):antibody),(免疫球蛋白不僅僅只是抗體)是一種由漿細(xì)胞(效應(yīng)B細(xì)胞)分泌,被免疫系統(tǒng)用來(lái)鑒別與中和外來(lái)物質(zhì)如細(xì)菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì),僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動(dòng)物的血液等體液中,及其B細(xì)胞的細(xì)胞膜表面??贵w能識(shí)別特定外來(lái)物的一個(gè)*特征,該外來(lái)目標(biāo)被稱(chēng)為抗原。

1. 一抗選擇

(1)確定抗體的名字,注意中英文名字、別名、亞型等信息。

(2)確定實(shí)驗(yàn)樣本的種屬,Human,Mouse,Rat等。我們的抗體說(shuō)明書(shū)都列出該抗體驗(yàn)證過(guò)的適用物種,可根據(jù)說(shuō)明書(shū)列出已驗(yàn)證的種屬來(lái)選擇適合你實(shí)驗(yàn)需要的抗體。

(3)確定您的實(shí)驗(yàn)類(lèi)型,Elisa,WB,IHC,ICC,或者是FACS。biorbyt的每種抗體說(shuō)明書(shū)都會(huì)列出抗體經(jīng)驗(yàn)證過(guò)適用的實(shí)驗(yàn)類(lèi)型,如果抗體說(shuō)明書(shū)沒(méi)有提及的應(yīng)用類(lèi)型,并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類(lèi)型,而僅是說(shuō)明尚未經(jīng)過(guò)此種實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

(4)單多克隆抗體的選擇。一般單克隆抗體特異性強(qiáng),但親和力相對(duì)小,檢測(cè)抗原靈敏度相對(duì)就低;而多克隆抗體特異性稍弱,但抗體的親和力強(qiáng),靈敏度高,但易出現(xiàn)非特異性染色(可以通過(guò)封閉等避免)。

(5)樣本抗原蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)。了解樣本抗原蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于選擇合適的抗體,待測(cè)樣本蛋白的結(jié)構(gòu)域和樣本在提取和處理過(guò)程中是否會(huì)變性,蛋白空間構(gòu)象的改變,會(huì)影響抗體的免疫親和反應(yīng)。

2. 二抗選擇

(1)種屬來(lái)源。主要根據(jù)一抗種屬來(lái)源而決定二抗來(lái)源,如一抗是小鼠來(lái)源,那二抗就買(mǎi)抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。

(2)標(biāo)記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標(biāo)記物。免疫組化,WB二抗主要選擇HRP,Biotin標(biāo)記的二抗,而免疫熒光染色可按實(shí)驗(yàn)需要選擇不同熒光素標(biāo)記的二抗,如FITC、Cy3、PE等。
 

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