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關(guān)于酶聯(lián)免疫檢測法的注意事項

更新時間:2020-11-03   點擊次數(shù):2376次

目前酶聯(lián)免疫法檢測用試劑盒種類繁多,在實際檢測中發(fā)現(xiàn),一般在試劑盒說明書中列出以下指標(biāo):di檢測限;回收率;交叉反應(yīng)率;標(biāo)準(zhǔn)曲線圖譜及數(shù)據(jù),標(biāo)準(zhǔn)曲線至少由5個濃度組成;IC50測定值及變形曲線點數(shù)目的是比較規(guī)范的試劑盒,可以選擇。

1.臨界值(cut-off)的確定
在實際使用酶聯(lián)免疫法檢測時要首先確定臨界值。通過檢測結(jié)果與臨界值的比較,可判定樣品為陰性或可疑。對于禁用藥物,檢測方法的臨界值為定量限,即現(xiàn)有的*的儀器檢測所能達(dá)到的di定量限。對于有g(shù)ao
殘留*(MRL)的藥物,檢測方法的臨界值為20份添加MRL濃度的樣品重復(fù)3次測定的均值減去1.64倍標(biāo)準(zhǔn)差。檢測結(jié)果如小于臨界值為陰性,大于或等于臨界值或標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定為可疑,需要用確證法確證。

2.檢測限的測定 可添加MRL和MRL上下各一個濃度。
每個試驗室在使用酶聯(lián)免疫法檢測時,應(yīng)做一下各自試驗室的檢測限。檢測限為20份空白樣品測定的均值加3倍標(biāo)準(zhǔn)差。如果經(jīng)規(guī)范操作后所得檢測限大于臨界值時,說明試劑盒背景干擾大,試劑盒靈敏度不能滿足檢測要求,應(yīng)與試劑盒廠家聯(lián)系或棄去不用選用另外的試劑盒。

3.酶聯(lián)免疫檢測方法驗證
在使用酶聯(lián)免疫法檢測樣品時,應(yīng)對方法進(jìn)行驗證。主要測定以下內(nèi)容:

①標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定,標(biāo)準(zhǔn)曲線至少由5個濃度組成,測定次數(shù)不少于5次,以確定工作濃度范圍和IC50范圍。一般臨界值為IC50附近,檢測靈敏度高。

②樣品檢測限的測定。

③樣品添加回收實驗。對禁用藥物可添加定量限和2倍定量限,對于有g(shù)ao殘留*(MRL)的藥物,可添加MRL和MRL上下各一個濃度。

準(zhǔn)確度:若回收率大于40%符合相應(yīng)檢測標(biāo)準(zhǔn)的要求。精密度:批內(nèi)變異系數(shù)每批平行樣之間的變異系數(shù)小于或等于25%,對于禁用藥物小于或等于30%。批間變異系數(shù)所有樣品間變異系數(shù)小于或等于30%,對于禁用藥物小于或等于40%。滿足以上準(zhǔn)確度和精密度要求,說明酶聯(lián)免疫方法可行,可用來檢測藥物殘留。

4.其他

①對于可用于多殘留檢測的試劑盒,以交叉反應(yīng)率低的藥物做陽性添加測定臨界值(cut-off)。

②實際檢測樣品時要包括以下實驗:至少做兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線,兩個陰性對照品,兩個添加臨界值(cut-off)的陽性對照品,兩個平行的待檢樣品。檢測結(jié)果出來后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線形狀(符合檢測要求為S形),IC50與臨界值是否相近及陽性樣品回收率,樣品平行情況可確定檢測是否可信。

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