久久久久久av无码免费网站下载,一本加勒比hezyo无码资源网,久久久久黑人强伦姧人妻,好爽毛片一区二区三区四

技術(shù)文章您現(xiàn)在的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 細胞裂怎么辦?

細胞裂怎么辦?

更新時間:2021-01-18   點擊次數(shù):1386次

     關(guān)于培養(yǎng)細胞樣品:

 
    1.融解ripa裂解液,混勻。取恰當(dāng)量的裂解液,在運用前數(shù)分鐘內(nèi)參加pmsf,使pmsf的終濃度為1mm。
 
    2.關(guān)于貼壁細胞:去除培養(yǎng)液,用pbs、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(假如血清中的蛋白沒有干擾,能夠不洗)。按照6孔板每孔參加150-250微升裂解液的份額參加裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細胞充沛接觸。一般裂解液接觸細胞1-2秒后,細胞就會被裂解。
 
    關(guān)于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞參加150-250微升裂解液的份額參加裂解液。再用手指輕彈以充沛裂解細胞。充沛裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉積。假如細胞量較多,必需分裝成50-100萬細胞/管,然后再裂解。
 
    3.充沛裂解后,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的page、western和免疫沉積等操作。 
 
    裂解液用量說明:一般6孔板每孔細胞參加150微升裂解液現(xiàn)已足夠,但假如細胞密度十分高能夠恰當(dāng)加大裂解液的用量到200微升或250微升。 
 
    關(guān)于安排樣品: 
 
    1.把安排剪切成細微的碎片。
 
    2.融解ripa裂解液,混勻。取恰當(dāng)量的裂解液,在運用前數(shù)分鐘內(nèi)參加pmsf,使pmsf的終濃度為1mm。
 
    3.按照每20毫克安排參加150-250微升裂解液的份額參加裂解液。(假如裂解不充沛能夠恰當(dāng)增加更多的裂解液,假如需求高濃度的蛋白樣品,能夠恰當(dāng)減少裂解液的用量。)
 
    4.用玻璃勻漿器勻漿,直至充沛裂解。
 
    5.充沛裂解后,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的page、western和免疫沉積等操作。
 
    6.假如安排樣品本身十分細微,能夠恰當(dāng)剪切后直接參加裂解液裂解,通過激烈vortex使樣品裂解充沛。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)試驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便,不用運用勻漿器,缺陷是不如運用勻漿器那樣裂解得比較充沛。 
 
    注:ripa裂解液的裂解產(chǎn)品中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團通明膠狀物,屬正?,F(xiàn)象。該通明膠狀物為含有基因組dna等的復(fù)合物。在不檢測和基因組dna結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下,能夠直接離心取上清用于后續(xù)試驗;假如需求檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,則能夠通過超聲處理打碎打散該通明膠狀物,隨后離心取上清用于后續(xù)試驗。假如檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子,例如nf-kappab、p53等時,一般不用進行超聲處理,就能夠檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子。

聯(lián)


丰满人妻在公车被猛烈进入电影| 无码人妻一区二区三区免费n鬼沢| 狼狼综合久久久久综合网| 在熟睡夫面前侵犯我在线播放| 亚洲第一av网站| 国产精品成人一区二区三区| 女人夜夜春高潮爽a∨片| 99久久婷婷国产综合亚洲| 国产精品久久成人网站 | 亚洲国产精品久久艾草| 精品高朝久久久久9999| 漂亮人妻被黑人久久精品| 久久人妻少妇嫩草av无码专区 | 丰满人妻一区二区三区免费视频| 国产伦精品一区二区三区妓女| 亚洲一区爱区精品无码| а天堂8中文最新版在线官网| 精品久久亚洲中文无码| 99精品国产高清一区二区麻豆| 成人一区二区免费视频| 亚洲国产精品无码久久98| 免费无码国产v片在线观看| 国模大尺度啪啪| 国产伦精品一区二区三区免费| 国产sm调教视频在线观看| 两根大肉大捧一进一出好爽视频| 波多野吉衣av无码| 亚洲av无码一区二区三区天堂| 免费人成年小说在线观看| 刺激一区仑乱| 国产精品18久久久久久麻辣| 亚洲av无码一区二区乱孑伦as| 蜜臀aⅴ国产精品久久久国产老师| 国产精品女同一区二区| 国产麻豆md传媒视频| 久久久精品免费| 成 人 在 线 免费观看| 好吊妞视频这里有精品| 久久午夜神器| 岳好紧好湿夹太紧了好爽矜持| 国产激情电影综合在线看|