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技術(shù)分享:ELISA加樣步驟的常見問題及對應(yīng)方法

更新時間:2021-02-02   點(diǎn)擊次數(shù):1169次

        ELISA實驗以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。選擇試劑時,應(yīng)選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

ELISA加樣步驟的常見問題:
    ①:過長(特別是室內(nèi)溫度較高時);
    ②:手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間;
    ③:加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣。

 

對應(yīng)解決方法:
    ①:標(biāo)本為血清,將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
    ②:加樣后及時放入孵箱。
    ③:加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
    ④:如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
    ⑤:標(biāo)本較多時,請分批操作。
               
        ELISA試劑盒在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。

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