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ELISA試劑盒:造成假陽性的錯誤操作有哪些?

更新時間:2021-02-23   點擊次數(shù):1722次

 ELISA實驗中造成假陽性的錯誤操作主要有如下幾點:

1、加樣
      對于間接ELISA標本一般都要進行稀釋,如果加樣不準就會造成誤差,尤其當稀釋倍數(shù)大時,很小的誤差,會導致較大的相對誤差,使陰性(或弱陽性)標本呈陽性(或陰性)。加樣時應將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產生氣泡。目前,大部分血站都已使用全自動酶免加樣系統(tǒng)處理標本,可較好地避免以上誤差。
2、洗滌
      在ELISA中正確的洗滌是保證得到可重復結果的關健一步,應引起操作者重視。無論是手工操作還是機器操作,得出不正確的結果常與不正確的洗滌有關,ELISA就是靠洗滌來達到分離游離和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以消除殘留在板孔中沒能與固體抗原或抗體結合的物質,以及在反應過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質。
3、 溫育
       每種試劑都有其合適的反應模式,其中溫度和溫育時間控制是重要因素。因孵育溫度高,反應時間長,會造成整板本底高,陽性率高。溫育一般用濕盒或水浴,反應板不宜疊放,以保證各板溫度都能迅速平衡,為避免蒸發(fā),板上應加蓋。
4、酶標儀判讀
     作為記錄測定結果的儀器,酶標儀的性能穩(wěn)定與否,決定結果的可靠度。首先酶標儀應定期進行保養(yǎng),對濾光片要定期校正;其次酶標儀波長設置要正確,使用雙波長,一個檢測波長,一個參比波長,以消除微孔板底部劃痕、不平、指印或液面高度差異造成的光干擾。此外,在用酶標儀讀數(shù)時先擦試微孔板底部并壓平板條。由于各種酶標儀性能有所不同,使用中應詳細閱讀說明書
綜上所述,由于酶聯(lián)免疫吸附技術目前在技術上缺乏標準化,盡管目前上以及我國有了部分標準血清或參比血清(血清盤)。但由于受方法學及技術條件的限制,在酶聯(lián)吸附測定中有時不可避免的會出現(xiàn)一定的非特異性,但我們可以通過以上措施把非特異性顯色降至限底,從而提高檢測的特異性,并得到更準確、可靠的實驗結果。
                    
      上海恒遠生物科技有限公司源自先進的酶聯(lián)免疫技術,涵蓋國內外專家的經驗與智慧。采用精良的技術和設備,確保品質的同時,降低成本,為更多有需要的研究人員,節(jié)省實驗經費,保證實驗質量,為國家的科技發(fā)展多做貢獻。多家生物科研基地合作伙伴,實力團隊傾力打造專注于elisa試劑盒的生產,研發(fā),助力您的科研試驗!

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