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ELISA試劑盒:造成假陽性的錯(cuò)誤操作有哪些?

更新時(shí)間:2021-02-23   點(diǎn)擊次數(shù):1424次

 ELISA實(shí)驗(yàn)中造成假陽性的錯(cuò)誤操作主要有如下幾點(diǎn):

1、加樣
      對于間接ELISA標(biāo)本一般都要進(jìn)行稀釋,如果加樣不準(zhǔn)就會造成誤差,尤其當(dāng)稀釋倍數(shù)大時(shí),很小的誤差,會導(dǎo)致較大的相對誤差,使陰性(或弱陽性)標(biāo)本呈陽性(或陰性)。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。目前,大部分血站都已使用全自動酶免加樣系統(tǒng)處理標(biāo)本,可較好地避免以上誤差。
2、洗滌
      在ELISA中正確的洗滌是保證得到可重復(fù)結(jié)果的關(guān)健一步,應(yīng)引起操作者重視。無論是手工操作還是機(jī)器操作,得出不正確的結(jié)果常與不正確的洗滌有關(guān),ELISA就是靠洗滌來達(dá)到分離游離和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以消除殘留在板孔中沒能與固體抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
3、 溫育
       每種試劑都有其合適的反應(yīng)模式,其中溫度和溫育時(shí)間控制是重要因素。因孵育溫度高,反應(yīng)時(shí)間長,會造成整板本底高,陽性率高。溫育一般用濕盒或水浴,反應(yīng)板不宜疊放,以保證各板溫度都能迅速平衡,為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋。
4、酶標(biāo)儀判讀
     作為記錄測定結(jié)果的儀器,酶標(biāo)儀的性能穩(wěn)定與否,決定結(jié)果的可靠度。首先酶標(biāo)儀應(yīng)定期進(jìn)行保養(yǎng),對濾光片要定期校正;其次酶標(biāo)儀波長設(shè)置要正確,使用雙波長,一個(gè)檢測波長,一個(gè)參比波長,以消除微孔板底部劃痕、不平、指印或液面高度差異造成的光干擾。此外,在用酶標(biāo)儀讀數(shù)時(shí)先擦試微孔板底部并壓平板條。由于各種酶標(biāo)儀性能有所不同,使用中應(yīng)詳細(xì)閱讀說明書
綜上所述,由于酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)目前在技術(shù)上缺乏標(biāo)準(zhǔn)化,盡管目前上以及我國有了部分標(biāo)準(zhǔn)血清或參比血清(血清盤)。但由于受方法學(xué)及技術(shù)條件的限制,在酶聯(lián)吸附測定中有時(shí)不可避免的會出現(xiàn)一定的非特異性,但我們可以通過以上措施把非特異性顯色降至限底,從而提高檢測的特異性,并得到更準(zhǔn)確、可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
                    
      上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司源自先進(jìn)的酶聯(lián)免疫技術(shù),涵蓋國內(nèi)外專家的經(jīng)驗(yàn)與智慧。采用精良的技術(shù)和設(shè)備,確保品質(zhì)的同時(shí),降低成本,為更多有需要的研究人員,節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi),保證實(shí)驗(yàn)質(zhì)量,為國家的科技發(fā)展多做貢獻(xiàn)。多家生物科研基地合作伙伴,實(shí)力團(tuán)隊(duì)傾力打造專注于elisa試劑盒的生產(chǎn),研發(fā),助力您的科研試驗(yàn)!

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