久久久久久av无码免费网站下载,一本加勒比hezyo无码资源网,久久久久黑人强伦姧人妻,好爽毛片一区二区三区四

技術(shù)文章您現(xiàn)在的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 蛋白質(zhì)如何提純呢?

蛋白質(zhì)如何提純呢?

更新時間:2021-03-04   點擊次數(shù):2297次
1、超速離心法
    此法分離和純化抗原的原理是利用各顆粒在梯度液中沉降速度的不同,使具有不同沉降速度的顆粒處于不同密度梯度層內(nèi),達到彼此分離的目的。常用的密度梯度介質(zhì)有蔗糖、甘油、CsCl等。
    用超速離心或梯度密度離心分離和純化抗原時,除個別成分外,極難將某一抗原成分分離出來,故只用于少數(shù)大分子抗原的分離,如IgM、C1q,甲狀腺球蛋白等,以及一些比重較輕的抗原物質(zhì)如載脂蛋白A、B等。多數(shù)的中、小分子量蛋白質(zhì)采用此種方法很難純化。
 
2、選擇性沉淀法
    其原理多根據(jù)各蛋白質(zhì)理化特性的差異,采用各種沉淀劑或改變某些條件促使蛋白質(zhì)抗原成分沉淀,從而達到純化的目的。常用的方法是鹽析沉淀法。
鹽析法的原理
    蛋白質(zhì)在水溶液中的溶解度取決于蛋白質(zhì)分子表面離子周圍的水分子數(shù)目,亦即主要是由蛋白質(zhì)分子外周親水基團與水形成水化膜的程度以及蛋白質(zhì)分子帶有電荷的情況決定的。蛋白質(zhì)溶液中加入中性鹽后,由于中性鹽與水分子的親和力大于蛋白質(zhì),致使蛋白質(zhì)分子周圍的水化層減弱乃至消失。同時,中性鹽加入蛋白質(zhì)溶液后由于離子強度發(fā)生改變,蛋白質(zhì)表面的電荷大量被中和,更加導(dǎo)致蛋白質(zhì)溶解度降低,使蛋白質(zhì)分子之間聚集而沉淀。由于各種蛋白質(zhì)在不同鹽濃度中的溶解度不同,不同飽和度的鹽溶液沉淀的蛋白質(zhì)不同,從而使之從其他蛋白分離出來。常用的鹽溶液是33%~50%飽和度的硫酸銨。鹽析法簡單方便,可用于蛋白質(zhì)抗原的粗提,丙種球蛋白的提取,蛋白質(zhì)的濃縮等。鹽析法提純的抗原純度不高,只適用抗原的初步純化。
 
3、凝膠層析法
    凝膠層析是利用分子篩作用對蛋白質(zhì)進行分離。凝膠是具有三維空間多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的物質(zhì),經(jīng)過適當(dāng)?shù)娜芤浩胶夂螅b入層析柱。一種含有各種分子的樣品溶液緩慢地流經(jīng)凝膠層析柱時,大分子物質(zhì)不易進入凝膠顆粒的微孔,只能分布于顆粒之間,因此在洗脫時向下移動的速度較快,先被洗脫。小分子物質(zhì)除了可在凝膠顆粒間隙中擴散外,還可以進入凝膠顆粒的微孔中,洗脫時向下移動的速度較慢,隨后被洗脫。因此,蛋白質(zhì)分子按分子大小被分離。
 
4、離子交換層析法
    離子交換層析的原理是利用一些帶離子基團的纖維素或凝膠,吸附交換帶相反電荷的蛋白質(zhì)抗原。由于各種蛋白質(zhì)的等電點不同,所帶的電荷量不同,與纖維素(或凝膠)結(jié)合的能力有差別。當(dāng)梯度洗脫時,逐步增加流動相的離子強度,使加入的離子與蛋白質(zhì)競爭纖維素上的電荷位置,從而使吸附的蛋白與離子交換劑解離。
在離子交換色譜技術(shù)中常用的離子交換劑有以下幾種
①具有離子交換基團的纖維素,如羧甲基(CM)纖維素、DEAE-纖維素
②具有離子交換基團的交聯(lián)葡聚糖、瓊脂糖和聚丙烯酰胺
③凝膠合成的高度交聯(lián)樹脂。
 
5、親和層析
    親和層析是利用生物大分子的生物特異性,即生物大分子間所具有專一親和力而設(shè)計的層析技術(shù)。例如抗原和抗體、酶和酶抑制劑(或配體)、酶蛋白和輔酶、激素和受體、IgG和葡萄球菌蛋白A(SPA)等物質(zhì)間具有一種特殊的親和力。例如提純IgG時,可將SPA吸附在一個惰性的固相基質(zhì)(如Speharose 2B、4B、6B等)上,并制備成層析柱。當(dāng)樣品流經(jīng)層析柱時,待分離的IgG可與SPA發(fā)生特異性結(jié)合,其余成分不能與之結(jié)合。將層析柱充分洗脫后,改變洗脫液的離子強度或pH值,IgG與固相基質(zhì)上的SPA解離,收集洗脫液便可得到欲純化的IgG。
    上海恒遠溫馨提示: 親和層析法純化蛋白質(zhì)抗原的主要優(yōu)點是純度高,簡單快捷,但成本較貴。
 
      

聯(lián)


日韩乱码人妻无码中文字幕视频| 日本久久久久亚洲中字幕| 久久天天躁狠狠躁夜夜躁2014| 亚洲人成网亚洲欧洲无码久久| 性久久久久久久| 精品久久久无码中文字幕| 波多野42部无码喷潮| 亚洲av激情无码专区在线播放| 末发育娇小性色xxxxx视频| 欧美丰满熟妇乱xxxxx网站| 插b内射18免费视频| 无码人妻一区二区三区免费| 人妻熟妇乱又伦精品视频| 免费无码毛片一区二区app| 最近2019中文字幕大全第二页| 亚洲中文字幕无码爆乳av| 免费看国产曰批40分钟| 亚洲av无码成人专区片在线观看| 无码人妻精品一区二区| 97超级碰碰人妻中文字幕| 丁香婷婷激情综合俺也去| 国产精品jizz在线观看老狼| 久久精品99国产精品日本| 国产一区二区三区不卡在线观看| 国产成人精品日本亚洲专区61 | 三年片免费观看大全有| 亚洲av无码专区首页| 久久综合精品国产二区无码 | 天天干天天日夜夜操| 亚洲av永久无码精品秋霞电影影院| 欧美精品国产综合久久| 国产精品免费久久久久影院仙踪林 | 久久久久亚洲av成人人电影| 欧洲熟妇精品视频| 色婷婷欧美在线播放内射| 777爽死你无码免费看一二区| 天堂一区人妻无码| 午夜精品一区二区三区在线观看| 久久久久成人精品无码| 激情伊人五月天久久综合| 国产激情电影综合在线看|