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ELISA法手工測定的影響因素

更新時(shí)間:2022-01-12   點(diǎn)擊次數(shù):1173次

ELISA法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的特點(diǎn),并具有操作簡便、無放射性危害的優(yōu)點(diǎn),因而多年來廣泛應(yīng)用于血站和醫(yī)院的實(shí)驗(yàn)室中,但在測定中常會(huì)出現(xiàn)一些誤差和問題。我們通過幾年的實(shí)驗(yàn)觀察,認(rèn)為影響結(jié)果的因素有如下方面。


1 試劑盒


(1)抗原、抗體活性對效價(jià)的影響:主要是試劑中抗體(或抗原)的效價(jià)降低或失活,結(jié)果不易判斷。再有ELISA法靈敏度高,對雜質(zhì)的反應(yīng)靈敏度也高,實(shí)驗(yàn)中空白對照OD值偏高或假陽性。(2)酶結(jié)合物濃度過高,也會(huì)導(dǎo)致OD值假性增高。


2 試驗(yàn)儀器


(1)加樣器是否經(jīng)過校正,酶免測定血清用血量很少,如手工加樣器的性能不好,吸取樣品不精確,會(huì)使結(jié)果忽高忽低。(2)每次洗板前,應(yīng)檢查洗板機(jī)針孔有無堵塞。


3 操作


(1)檢測前先將試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min后使用,試劑用完及時(shí)放回冰箱冷藏,以免造成試驗(yàn)結(jié)果假性降低。(2)加樣時(shí)注意勿觸及包被板底部,以免擦傷包被物使抗體(抗原)脫落而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。(3)洗滌不充分,會(huì)使結(jié)果假性增高,過分洗滌呈假陰性。(4)比色時(shí)應(yīng)保持包被孔底部無異物、無水汽,特別是冬季板從37℃水浴箱取出時(shí),底部留有水汽,應(yīng)將板底擦干后進(jìn)行比色,水汽或孔內(nèi)氣泡也會(huì)使OD值升高。(5)抗原與抗體反應(yīng)達(dá)到*平衡,依賴于溫度與時(shí)間。溫度高于45℃易引起失活及標(biāo)記物脫落,溫度低于4℃,影響反應(yīng)速度??傊?,由于ELISA實(shí)驗(yàn)的影響因素較多,在實(shí)際工作中必須操作規(guī)范、仔細(xì),避免和排除各種因素的影響,使之得到準(zhǔn)確可靠的檢驗(yàn)結(jié)果。


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