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人蛋白磷酸化酶2A(PP2A)的簡易測試方法

更新時間:2022-07-01   點擊次數(shù):774次

【預(yù)期用途】

僅供科研使用,本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中蛋白磷酸化酶2A(PP2A)活性。


【檢測原理】

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人蛋白磷酸化酶2A(PP2A)水平。用純化的人蛋白磷酸化酶2A(PP2A)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入蛋白磷酸化酶2A(PP2A),再與HRP標記的蛋白磷酸化酶2A(PP2A)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的蛋白磷酸化酶2A(PP2A)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人蛋白磷酸化酶2A(PP2A)活性濃度。


【產(chǎn)品性能】

1、物理性能

試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝,無破損漏氣(如有漏氣,不影響使用)。

2、劑量反應(yīng)曲線線性

標準品劑量反應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù)r值,大于等于0.9900。

3、檢測范圍

1.2U/L -45U/L。

4、靈敏度

檢出劑量最小不能小于小于0.3U/L 。

5、精密度

精密度用樣品測定值的變異系數(shù)CV 表示。CV(%) = SD/mean×100

批內(nèi)差:取同批次試劑盒對低、中、高值定值樣本進行定量檢測,每份樣本連續(xù)測定20 次,分別計算不同濃度樣本的平均值及SD 值。

批間差:選取3 個不同批次的試劑盒分別對低、中、高值定值樣本進行定量測定,每個樣本使用同一試劑盒重復(fù)測定10 次,分別計算不同濃度樣本的平均值及SD 值。

批內(nèi)差: CV<5.9%

批間差: CV<8.1%

6、回收率

7、線性

8、特異性

9、穩(wěn)定性


操作步驟

1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

8.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10-20分鐘。

10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

11.測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

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