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ELISA實驗結(jié)果為什么有時候會復(fù)測?

更新時間:2023-03-06   點擊次數(shù):494次


ELISA實驗過程中時常會出現(xiàn)復(fù)測現(xiàn)象即我們時常說的"花板"現(xiàn)象,這種現(xiàn)象影響檢驗結(jié)果的正確判讀,對工作造成一定的不利影響,一旦出現(xiàn)“花板",實驗結(jié)果必須放棄,重新進(jìn)行,不僅浪費物料和時間,而且還會出現(xiàn)樣本量缺少、交叉污染、報告延遲等一系列問題。

 

影響因素分析如下:

 

一、標(biāo)本因素

 

正確處理標(biāo)本,防止大規(guī)模溶血、血漿層異物、使用一次性加樣槍頭,防止交叉污染。血清和血漿均可以用于檢測,但血清的分離應(yīng)在抽血后等血液wan全凝固后再離心。

 

二、試劑因素

 

正確保存及使用有效試劑。使用過期試劑及底物接觸金屬容器、底物混合后放置時間較長均影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。選擇試劑時應(yīng)選擇靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好,批間差小的試劑。不同廠家的試劑不能混用,包括底物和洗滌液。檢測前應(yīng)將試劑放置室溫平衡半小時,洗滌液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配,同時觀察濃縮洗滌液中有無結(jié)晶,若有結(jié)晶應(yīng)放37℃水浴中融化后才可使用。

 

三、技術(shù)人員操作因素

 

嚴(yán)格按照相關(guān)實驗SOP操作實驗。加樣時應(yīng)盡可能的垂直加樣,并加在包被孔的底部(注:勿應(yīng)用力過度破壞底部包被物質(zhì)),不可加在孔的上部及外部。

 

四、溫浴的因素

 

使用水浴箱作為溫浴設(shè)備時,應(yīng)注意水的深淺對結(jié)果的影響,當(dāng)水浴箱中水的的實測溫度37℃時,則水面溫度可能只有34℃,空氣溫度更低,甚至只有二十多度,所以當(dāng)水浴箱中水位過低時則酶標(biāo)微孔板沒有浸入水中,則反應(yīng)溫度會達(dá)不到37℃,相應(yīng)的就會影響酶促反應(yīng)。為防止邊緣效應(yīng),酶標(biāo)板應(yīng)盡量浸入水中,以保證受熱的均勻。水浴時,酶標(biāo)板應(yīng)封好,以免水滴滴入包被孔中,或陽性標(biāo)本的蒸發(fā)。嚴(yán)格掌握溫浴時間,不可為了早點出結(jié)果擅自縮短溫浴時間。

 

五、洗板機的因素

 

廢液瓶裝滿后應(yīng)及時清空,以防止廢液回流對管道的污染,而使洗滌不che底,造成“花板"。洗板結(jié)束后應(yīng)用蒸餾水che底清洗管道,以防止廢液在管道中的殘留。同時應(yīng)根據(jù)儀器維護(hù)保養(yǎng)程序,定期對洗板機進(jìn)行維護(hù)保養(yǎng)。

 

六、酶標(biāo)儀

 

酶標(biāo)儀應(yīng)安置在避光條件下,比色前應(yīng)提前15-30分鐘開機預(yù)熱,這樣測定結(jié)果會更穩(wěn)定。為防止顯色的加深或減弱,顯色時間完成后應(yīng)立即滴加終止液(避免氣泡產(chǎn)生),并在10分鐘內(nèi)完成比色。酶標(biāo)板從水浴箱取出后應(yīng)擦凈孔底水滴,若有水滴或紙屑?xì)埩粼诳椎?,會造成酶?biāo)儀讀數(shù)錯誤,誤判定為“花板"。


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