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三點鑒定抗血清質量

更新時間:2011-10-28   點擊次數(shù):2470次

 抗血清的質量直接影響分析方法的特異性和靈敏度。用于鑒定抗血清質量的參數(shù)主要有幾項: 

    1.親和性(affinity)  是指抗體分子上一個抗原結合部位與相應的抗原決定簇之間的結合強度,常用親和常數(shù)Ka表示。Ka是正/逆向反應速度常數(shù)的比值,單位為稀釋度單位(L/mol或LM-1),表示需將lmol抗體稀釋至多少升,才能使抗原—抗體結合下降50%;而Ka的倒數(shù)為解離常數(shù)(Kd),其單位為濃度單位(mol/L)。為提高放射免疫分析的靈敏度、精密度和準確度,需選用Ka值高(109一1012L/mo1)的抗血清。
     2.特異性(specificity)  是指一種抗體識別相應抗原決定簇的能力。由于一種抗原常有結構極相似的類似物(同類物、前體、降解物和代謝物),其抗血清可能對該抗原的類似物產生交叉反 應。因此,抗體的特異性通常以交叉反應率表示:將反應的zui大結合率抑制下降50%時特異性抗原與類似物的劑量(ED50)之比來計算交叉反應率。如胰島素標準品使125I胰島素與抗血清的zui大結合下降50%的用量為0.5ng,而類似的物(前體)胰島素原的用量為500ng,則相應的交叉反應率(%)為:0.5/500=0.1%。
抗體交叉反應程度的高低直接影響測定結果的準確性,但應注意,抗血清特異性與分析方法特異性并不*相同,因后者對某一待測抗原的特異性程度不僅取決于所用抗體,尚有賴于標記物的質量和方法學設計。
     3.效價(titer)  是反映抗血清中有效抗體含量的相對參數(shù),即抗血清稀釋至能與抗原發(fā)生有效反應的zui大稀釋度。通常是將一株抗血清作系列稀釋后與標記抗原反應,計算不同稀釋 度時抗體結合標記抗原的百分率,繪制出抗體稀釋度曲線。結合具體方法設計要求。效價一般指結合50%標記抗原時,抗血清的稀釋度。

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