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植物蛋白提取實驗說明

更新時間:2023-09-05   點擊次數(shù):551次

植物蛋白提取試劑適用于多種植物根,莖,葉及果實等的新鮮或凍存組織。植物組織成分復雜,含有較多酚類物質(zhì)、多糖、色素、次生代謝物質(zhì)等,致使植物蛋白質(zhì)的分離提取變得困難和復雜。本試劑采用優(yōu)化的試劑和程序,能有效提取多種植物中的可溶性和疏水性蛋白成分,有效去除植物組織所含的多酚、多糖、醌、色素、脂質(zhì)、次生代謝物質(zhì)等干擾蛋白質(zhì)研究的成分,使提取的蛋白質(zhì)處于蕞佳的活性狀態(tài)和檢測狀態(tài),適應于酶學活性測定,單向及雙向蛋白電泳,Western Blot和免疫共沉淀分析等蛋白質(zhì)研究實驗。

 

組成和規(guī)格:無色透明的提取試劑50 ml100 ml。

貯存:4°C,密封避光1年。

用途:提取多種植物組織和細胞的可溶性和疏水性蛋白。如蘋果、花生、土豆、煙葉、菠菜、梅花等。

 

操作步驟:

1. 組織勻漿,必須充分勻漿,此步驟非常關鍵:

(1) 凍存組織勻漿:預先將研缽置于-20°C ~70°C冰箱內(nèi)冷凍。取液氮凍存的植物組織,放入冰凍的研缽內(nèi)研磨至粉末狀,注意使組織一直處于冰凍狀態(tài),如組織顏色加深或變黑通常表明組織已融化。將研磨好的組織轉移到EP 管中,按每200 mg植物組織加500 ul的比例加提取試劑,混勻后冰上放置20分鐘,其間可數(shù)次顛倒混勻,以便蛋白溶解。

(2) 新鮮組織勻漿:取新鮮組織放入研缽中,按每200 mg植物組織加500ul的比例加提取試劑,充分研磨使勻漿液中看不到大的塊狀或片狀組織,保證組織研磨破碎。轉移至離心管內(nèi),冰上放置20分鐘。

2. 離心:12000 g離心15分鐘,棄去沉淀。蛋白在上清中。

3. 取離心后的上清,轉移至新管,立即使用或-70°C凍存。通常上清內(nèi)植物色素已基本去除,如有少量殘留亦不影響蛋白定量及電泳實驗。建議用BCA方法進蛋白定量(我公司的BCA蛋白定量試劑盒#P1511)。

 

如進行雙向電泳或欲che底清除色素等雜質(zhì)可進行以下內(nèi)驟:

1. 取上清液加入4倍體積的丙酮或甲醇混勻,-20°C至少一小時以充分沉淀蛋白質(zhì)。

2. 12000 g離心15分鐘沉淀蛋白。

3. 棄去上清。自然干燥蛋白沉淀,依據(jù)試驗將沉淀溶于相應的緩沖液。如進行Western Blot 亦可用提取試劑溶解。

 

常見問題及解決方法:

1. 提取的蛋白量少:

1) 組織蛋白含量較少,如水果等,可增加組織量;

2) 組織勻漿不充分,如纖維較多的組織,破碎較困難,應適當延長勻漿時間;

3) 組織過老或水分丟失致使其干燥,故盡量選用新鮮較嫩的組織;

4) 甲醇或丙酮沉淀后蛋白溶解不充分,應延長溶解時間或使用較強的蛋白溶解劑。

 

2. 蛋白質(zhì)量不佳:

1)提取的蛋白有多酚或色素等雜質(zhì)殘留,可重復用丙酮或甲醇沉淀;

2) 蛋白質(zhì)降解,操作各步驟均應在冰上進行;加入蛋白酶抑制劑。

 

 


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