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鹽析法與抗體的分離純化

更新時(shí)間:2024-05-28   點(diǎn)擊次數(shù):696次

鹽析法原理


蛋白質(zhì)的溶解度在必定范圍內(nèi)隨鹽的濃度而改變。在低鹽濃度下溶解度跟著鹽濃度而添加,當(dāng)鹽濃度到達(dá)必定水平常,其溶解度又以不一樣程度降低并先后分出。其原理是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)分子的極性基團(tuán)有著靜電引力,當(dāng)水中參加少數(shù)鹽類時(shí),鹽類離子與水分子對(duì)蛋白質(zhì)分子上極性基團(tuán)的影響,使蛋白質(zhì)在水中溶解度增大。但鹽濃度添加到必定程度時(shí),水的活度降低,蛋白質(zhì)外表的電荷被中和,水化膜損壞,致使蛋白質(zhì)分子互相集合而沉積。鹽析法即是依據(jù)不一樣蛋白質(zhì)在必定濃度的鹽溶液中溶解度不一樣而到達(dá)互相別離的辦法。


鹽的挑選


蛋白質(zhì)鹽析常用中性鹽,主要有硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉等。其間使用最-廣的是硫酸銨,其長(zhǎng)處是溫度系數(shù)小,溶解度大(25℃時(shí)飽滿溶解度為4.1mol/L,即767g/L)。在不一樣的飽滿硫酸銨溶液范圍內(nèi),不一樣蛋白質(zhì)依次分出;并且硫酸銨價(jià)廉易得,分段效果好,不簡(jiǎn)單導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性。

硫酸銨濃溶液的pH常在4.5~5.5之間,市售的硫酸銨還常富含少數(shù)游離硫酸,pH值通常在4.5以下,須用氨水調(diào)節(jié)其pH值至7.0擺布。


鹽析須知

1、鹽的飽滿度:鹽的飽滿度是影響蛋白質(zhì)鹽析的主要因素,不一樣蛋白質(zhì)的鹽析請(qǐng)求鹽的飽滿度不一樣。別離幾個(gè)混合組分的蛋白質(zhì)時(shí),鹽的飽滿度常由低到高逐步添加,每呈現(xiàn)一種蛋白質(zhì)沉積進(jìn)行離心別離后,再繼續(xù)添加鹽的飽滿度,使第二種蛋白質(zhì)沉積。如用硫酸鹽鹽析別離血漿蛋白,當(dāng)飽滿度到達(dá)20%時(shí),纖維蛋白原首先分出;飽滿度增至28%~33%時(shí),優(yōu)球蛋白分出;飽滿度到達(dá)33%~50%時(shí),球蛋白分出;飽滿度大于50%以上時(shí),清蛋白分出,免疫球蛋白常在飽滿度在33%開(kāi)端分出。

2、pH值:在等電點(diǎn)時(shí),蛋白質(zhì)溶解度最小,簡(jiǎn)單沉積分出。故鹽析時(shí)除個(gè)別特殊情況外,pH值常挑選在被別離的蛋白質(zhì)等電點(diǎn)附近。

3、蛋白質(zhì)濃度:在一樣鹽析條件下,蛋白質(zhì)濃度越高越易沉積,高濃度雖對(duì)沉積有利,但濃度過(guò)高,也簡(jiǎn)單導(dǎo)致別的蛋白的共沉積,故有必要挑選恰當(dāng)濃度,盡可能避免共沉積效果的攪擾。

4、溫度:因?yàn)楦邼舛鹊柠}溶液對(duì)蛋白質(zhì)有必定保護(hù)效果,鹽析操作一般可在室溫下進(jìn)行,但在使用某些中性鹽進(jìn)行鹽析時(shí),溫度對(duì)鹽溶解度的影響對(duì)比明顯。

5、脫鹽:蛋白質(zhì)用鹽析沉積別離后,常需求脫鹽才干獲得純品。最-常用的脫鹽辦法是透析。通過(guò)透析袋表里的離子交換,最后使透析袋內(nèi)溶液的鹽濃度與外界相一致。

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