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病毒中和實(shí)驗(yàn)

更新時(shí)間:2024-12-19   點(diǎn)擊次數(shù):889次

病毒中和實(shí)驗(yàn)是一種重要的免疫學(xué)技術(shù),用于評估抗體能否中和病毒的感染性。這種實(shí)驗(yàn)不僅具有高度的特異性和敏感性,而且是病毒學(xué)研究中不可-或缺的工具。


一、實(shí)驗(yàn)原理

病毒中和實(shí)驗(yàn)基于特異性抗病毒抗體(中和抗體)與病毒結(jié)合后,使病毒失去吸附和穿入宿主細(xì)胞的能力,從而抑制病毒的復(fù)制和感染過程。中和抗體與病毒的結(jié)合類似于化學(xué)中的酸堿中和反應(yīng),因此得名。這種中和作用不僅具有嚴(yán)格的種、型特異性,還表現(xiàn)出量的特性,即一定量的病毒必須有相應(yīng)數(shù)量的中和抗體才能被完-全中和。


二、實(shí)驗(yàn)方法

病毒中和實(shí)驗(yàn)的方法主要包括簡單定性試驗(yàn)、固定血清稀釋病毒法、固定病毒稀釋血清法以及空斑減少法等。


以下是幾種常用方法的詳細(xì)步驟:

1.?固定病毒稀釋血清法?:

將已知病毒量固定,而血清做倍比稀釋。

將病毒原液稀釋成每一單位劑量含200LD50(或EID50、TCID50),與等量的遞進(jìn)稀釋的待檢血清混合,置37℃孵育1小時(shí)。

每一稀釋度接種3~6只實(shí)驗(yàn)動物(或雞胚、培養(yǎng)細(xì)胞),記錄每組動物的存活數(shù)和死亡數(shù)。

按Reed-Muench法或Karber法計(jì)算血清的中和效價(jià)。


2.?固定血清稀釋病毒法?:

將病毒原液做10倍遞進(jìn)稀釋,分裝兩列無菌試管。

第一列加等量正常血清(對照組),第二列加待檢血清(中和組),混合后置37℃孵育1小時(shí)。

分別接種實(shí)驗(yàn)動物(或雞胚、細(xì)胞培養(yǎng)),記錄每組死亡數(shù)、累積死亡數(shù)和累積存活數(shù)。

按Reed-Muench法或Karber法計(jì)算LD50,然后計(jì)算中和指數(shù)。


3.?空斑減少法?:

將已知空斑單位的病毒稀釋到每一接種劑量含100空斑形成單位(PFU),加等量遞進(jìn)稀釋的血清,37℃孵育1小時(shí)。

每一稀釋度接種3個(gè)已長成單層細(xì)胞的容器,每容器接種0.2~0.5mL。

置37℃孵育1小時(shí),使病毒充分吸附,再在其上覆蓋低熔點(diǎn)營養(yǎng)瓊脂。

待瓊脂凝固后置37℃的CO2溫箱中培養(yǎng)。同時(shí)用同一稀釋度的病毒加等量Hanks液同樣處理作對照。

數(shù)天后分別計(jì)算空斑數(shù),用Reed-Muench法或Karber法計(jì)算血清的中和滴度。


三、實(shí)驗(yàn)應(yīng)用

病毒中和實(shí)驗(yàn)在病毒學(xué)研究中具有廣泛的應(yīng)用,主要包括:

?鑒定病毒?:通過中和試驗(yàn)可以確定病毒的種類和型別。

?分析病毒抗原的性質(zhì)?:了解病毒的抗原特性,有助于疫苗的研發(fā)和疾病的診斷。

?測定免疫血清的抗效價(jià)和疫苗接種后的效果?:評估疫苗接種后的免疫效果,為疫苗的優(yōu)化提供數(shù)據(jù)支持。

?測定患者血清中的抗體?:用于診斷病毒性疾病,評估患者的免疫狀態(tài)。


四、注意事項(xiàng)

在進(jìn)行病毒中和實(shí)驗(yàn)時(shí),需要注意以下幾點(diǎn):

?試驗(yàn)條件?:實(shí)驗(yàn)必須在敏感的動物體內(nèi)(包括雞胚)和培養(yǎng)細(xì)胞中進(jìn)行,以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。

?血清處理?:用于實(shí)驗(yàn)的血清必須經(jīng)過加熱滅活處理,以去除非特異性抑制物。

?對照設(shè)置?:每次實(shí)驗(yàn)必須設(shè)有陽性對照、陰性對照和細(xì)胞對照,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

?操作要求?:實(shí)驗(yàn)操作要求嚴(yán)格、精確,并且要進(jìn)行無菌操作,以避免污染和誤差。


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