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ELISA試劑盒樣本處理方法

更新時(shí)間:2025-02-28   點(diǎn)擊次數(shù):348次

?一、核心處理流程?

?1. 樣本類型與預(yù)處理?

?樣本類型

?處理方法(步驟)

?關(guān)鍵注意事項(xiàng)

?血清

全血靜置30分鐘(室溫),離心2000×g 10分鐘(4℃),取上清

避免溶血;避免反復(fù)凍融(最多3次)

?血漿?

抗凝全血(EDTA/肝素)離心3000×g 15分鐘(4℃),取上層血漿

抗凝劑需與試劑盒兼容(詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū))

?細(xì)胞上清

直接離心1000×g 5分鐘去除細(xì)胞碎片,上清分裝保存

避免細(xì)胞裂解污染(可能干擾檢測(cè))

?組織勻漿

組織剪碎后液氮研磨,按比例加入PBS(含蛋白酶抑制劑)勻漿,離心12000×g 20分鐘取上清

控制總蛋白濃度(建議1-10 mg/mL

?尿液/唾液

離心2000×g 10分鐘去除沉淀,上清加入0.1% BSA穩(wěn)定

檢測(cè)前需稀釋(避免高鹽/酸堿干擾)

?

2. 保存與運(yùn)輸?

l短期保存?:4℃冷藏(≤24小時(shí)),避免微生物滋生。

l長(zhǎng)期保存?:-80℃分裝凍存(避免反復(fù)凍融),使用凍存管標(biāo)注批次/日期。

l運(yùn)輸?:干冰(-80℃)或冷鏈箱(2-8℃),避免劇烈震蕩。

 

?二、質(zhì)量控制要點(diǎn)?

1.?樣本稀釋?

l按試劑盒要求梯度稀釋(常用稀釋液:PBS+1% BSA)。

l避免基質(zhì)效應(yīng)?:高脂血/溶血樣本需超速離心或過(guò)濾。

 

2.?干擾物處理?

l去除內(nèi)源性酶?:過(guò)氧化氫酶(HRP系統(tǒng))或堿性磷酸酶(AP系統(tǒng))抑制劑。

l去除類風(fēng)濕因子?:添加IgG阻斷劑(針對(duì)血液樣本)。

3.?質(zhì)控樣本?

l陽(yáng)性/陰性對(duì)照?:每板至少設(shè)置2孔。

l?標(biāo)準(zhǔn)曲線?:覆蓋檢測(cè)范圍(建議R2≥0.99)。


三、常見(jiàn)問(wèn)題與解決方案

?問(wèn)題

?可能原因

?解決方案

?OD值異常高/

樣本過(guò)度稀釋/未稀釋

預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化稀釋比例,檢查標(biāo)準(zhǔn)曲線

 

?板內(nèi)重復(fù)性差

離心不徹-底或氣泡干擾

離心后靜置5分鐘,加樣時(shí)避免產(chǎn)生氣泡

 

?非特異性顯色

交叉反應(yīng)或封閉不充分

增加封閉時(shí)間(1小時(shí)),使用專用封閉劑

?

?

提示?:不同品牌試劑盒可能存在差異,務(wù)必以說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)!


針對(duì)以上技術(shù)資訊內(nèi)容,如果您有不太清楚或者想了解更多信息(包括基本信息/技術(shù)資料/解決方案),都可以隨時(shí)咨詢上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司業(yè)務(wù)員。我司力于提供生命科學(xué)領(lǐng)域的技術(shù)服務(wù),提供全-方位實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù),為廣大科研工作者大大節(jié)省了重復(fù)勞動(dòng)的時(shí)間和精力,我們有過(guò)硬的技術(shù)咨詢和完善的售后服務(wù),為您解決后顧之憂。

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