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如何科學(xué)挑選適用的ELISA試劑盒?實(shí)驗(yàn)人必看的避坑指南

更新時(shí)間:2025-04-18   點(diǎn)擊次數(shù):284次

一、明確檢測(cè)目標(biāo)?

1.檢測(cè)對(duì)象是什么?

明確待測(cè)物是細(xì)胞因子、激素、病毒抗體還是其他蛋白。不同試劑盒針對(duì)的抗原表位和抗體對(duì)可能不同。

關(guān)鍵點(diǎn):查看試劑盒說明書中的“檢測(cè)范圍"和“交叉反應(yīng)",確認(rèn)是否覆蓋你的目標(biāo)物種和異構(gòu)體(如人/小鼠/大鼠)。


2.需要定量還是定性?

定量試劑盒需提供標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)準(zhǔn)曲線,適合精確測(cè)量濃度;定性試劑盒(如診斷用)通常只判斷陰陽性。


二、匹配樣本類型

不同樣本的處理方式可能影響檢測(cè)結(jié)果:

血清/血漿:需避免溶血、脂血(可能引起非特異性結(jié)合)。

細(xì)胞培養(yǎng)上清:注意培養(yǎng)基中是否含高濃度BSA或胎牛血清(可能干擾檢測(cè))。

組織裂解液:需驗(yàn)證裂解緩沖液成分是否與試劑盒兼容(如避免強(qiáng)去垢劑)。

提示:試劑盒說明書會(huì)標(biāo)注已驗(yàn)證的樣本類型,若使用特殊樣本(如腦脊液、唾液),建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。


三、選擇試劑盒類型

ELISA有四大常見類型,適用場(chǎng)景不同:

image.png

優(yōu)先選擇夾心法(靈敏度高、特異性強(qiáng)),但小分子只能選競(jìng)爭(zhēng)法。


四、評(píng)估試劑盒性能

1.靈敏度與檢測(cè)限

靈敏度(最-低檢測(cè)濃度)和檢測(cè)范圍需覆蓋你的樣本濃度。例如:檢測(cè)血清細(xì)胞因子時(shí),若樣本濃度低,需選擇高靈敏度試劑盒(如靈敏度≤1 pg/mL)。

2.批間差與穩(wěn)定性

查看廠商是否提供不同批次的CV(變異系數(shù))數(shù)據(jù),批間差應(yīng)<15%。避免因批次差異導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差。

3.抗體對(duì)來源

單克隆抗體特異性高但可能識(shí)別單一表位;多克隆抗體靈敏度高但需驗(yàn)證交叉反應(yīng)。建議選擇經(jīng)Western Blot或質(zhì)譜驗(yàn)證的抗體。


五、驗(yàn)證與優(yōu)化

陽性/陰性對(duì)照:試劑盒應(yīng)提供明確對(duì)照,用于判斷實(shí)驗(yàn)有效性。

回收率實(shí)驗(yàn):在樣本中加入已知濃度標(biāo)準(zhǔn)品,回收率應(yīng)在80%-120%。

重復(fù)性測(cè)試:同一樣本重復(fù)3次檢測(cè),CV值應(yīng)<10%。

若背景信號(hào)過高,可嘗試:縮短顯色時(shí)間、優(yōu)化封閉液(如使用5%脫脂奶粉)、增加洗滌次數(shù)。

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