用免疫磁珠做細(xì)胞分選(MACS)是簡(jiǎn)捷的免疫細(xì)胞及其它細(xì)胞的分離純化方法。
原理是已包被一抗的磁珠與細(xì)胞表面相應(yīng)分子特異性結(jié)合,或者已包被二抗(羊抗小鼠或羊抗大鼠)的磁珠與預(yù)先已與細(xì)胞表面分子特異結(jié)合的一抗結(jié)合。磁珠攜帶與之結(jié)合的細(xì)胞吸附于分離柱/試管上,實(shí)現(xiàn)陽(yáng)性細(xì)胞分離或陰性細(xì)胞的分離。本節(jié)介紹超微磁珠間接標(biāo)記、用分離柱陽(yáng)性分選細(xì)胞的方法。
Protocal:
1.離心收集待分離細(xì)胞,用少量PBE孵育液(0.5%BSA、0.08%EDTA PH7.2 PBS,真空抽濾除菌及液體內(nèi)氣體)充分混懸細(xì)胞(0.5ml/1×108細(xì)胞),加入一抗(10~20μg/ml終濃度),4° C孵育30分鐘。
2.用20倍體積PBE洗細(xì)胞一次,再加PBE(0.3ml/1×108細(xì)胞)充分混懸細(xì)胞后,加入相應(yīng)二抗包被的超微磁珠,混勻后置8~15° C孵育10~15分鐘。
3.將分離柱安裝入磁場(chǎng)中,加入0.5ml PBE,在重力作用下自然流盡,以預(yù)處理分離柱。