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人PREX1蛋白(PREX1)ELISA實驗說明

更新時間:2025-08-29   點擊次數(shù):41次

檢測范圍                                                         

20pg/ml-900pg/ml

 

使用目的

本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中PREX1蛋白(PREX1)含量。

 

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人PREX1蛋白(PREX1)水平。用純化的人PREX1蛋白(PREX1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入PREX1蛋白(PREX1),再與HRP標記的PREX1蛋白(PREX1)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹-底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的PREX1蛋白(PREX1)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人PREX1蛋白(PREX1)濃度。

 

標本要求 

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

 

操作步驟

1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

800pg/ml

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

400pg/ml

4號標準品

150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

200pg/ml

3號標準品

150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

100pg/ml

2號標準品

150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

50pg/ml

1號標準品

150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

 

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4. 配液:將30倍(48T的20倍)濃縮洗滌液用蒸餾水30倍(48T的20倍)稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

11. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。


注意事項

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標準曲線,最好做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

 

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6個月

 

完整版說明書可咨詢我司業(yè)務(wù)員。上海恒遠生物科技有限公司是國內(nèi)ELISA試劑盒優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商,代理銷售不同ELISA試劑盒品牌的進口/國產(chǎn)ELISA試劑盒,專業(yè)供應(yīng)科研實驗所需的培養(yǎng)基,抗體,動物血清血漿,標準品對照品,化學試劑,酶聯(lián)免疫試劑盒,白介素試劑盒,金標檢測試劑盒,微生物,蛋白質(zhì),ELISA種屬涵蓋廣,憑借多年行業(yè)經(jīng)驗,完善的售后服務(wù),高質(zhì)量的產(chǎn)品。如果您有實驗上的問題歡迎來咨詢。

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