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IgG的Protein A親合膜色譜法分析

更新時間:2013-05-02   點擊次數(shù):1563次


Protein A親合膜色譜法
膜色譜采用具有一定孔徑的膜作為介質(zhì),連接配基,利用膜配基與蛋白質(zhì)等目標(biāo)作用進行分離純化,當(dāng)料液以一定流速流過膜的時候,目標(biāo)分子與膜介質(zhì)表面或膜孔內(nèi)基團特異性結(jié)合,而雜質(zhì)則透過膜孔流出,待處理結(jié)束后再通過洗脫液將目標(biāo)分子洗脫下來.Protein A能與人IgG分子的Fc段結(jié)合,但只結(jié)合其中的IgGl,IgG2和IgG4亞類,不能結(jié)合IgG3亞類[1“15].用木纖維與甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯(GMA)共聚接枝形成含有活性環(huán)氧基團的復(fù)合介質(zhì),經(jīng)過
處理后,制成膜裝入①16 mm×6 mm的柱中,共裝膜片20層,然后用0.15 mol/L NaCI的0.02mol/L pH7.4的磷酸鹽緩沖液平衡柱子備用.將
2 mL血漿用0.15 mol/I。NaCl的0.02 mol/LpH7.4的磷酸鹽緩沖液稀釋一倍,以2 mL/min的速度循環(huán)上樣5 min,用0.2 mol/L pH2.3的甘
氨酸--HCI緩沖液洗脫.洗脫峰的峰形較好,拖尾不嚴(yán)重.用毛細管電泳對純化的IgG進行分析,純度達到98%以上
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