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晚期糖基化終端產(chǎn)物(AGEs)檢測說明書

更新時間:2013-07-11   點擊次數(shù):2697次

                                              晚期糖基化終端產(chǎn)物(AGEs)檢測說明書

越來越多的證據(jù)指出晚期糖基化終端產(chǎn)物(AGEs)修飾蛋白嚴重影響到老齡化人群的健康問題。AGEs是葡萄糖與自由的蛋白質(zhì)氨基基團發(fā)生非酶促糖基化反應(yīng)的終端不可逆代謝產(chǎn)物的總稱。其在人體內(nèi)的積累會引發(fā)組織或器官一系列的病理性變化,從而導致白內(nèi)障、阿爾茨海默氏病、骨關(guān)節(jié)炎、心功能不全等疾病發(fā)生。糖尿?。ǜ哐牵┎“l(fā)也與AGE在體內(nèi)積累速度加快有關(guān)。

研究發(fā)現(xiàn)AGEs的來源主要是葡萄糖,還有二羰基化合物、短鏈還原糖和葡萄糖的其他代謝途徑。目前確定結(jié)構(gòu)屬于AGE的單體化合物有CML、CELPentosidine, Pyrraline, Imidazolone, Crosslin等,針對這些化合物和AGEsAGE14生產(chǎn)的抗體大量應(yīng)用于生命科學和醫(yī)學領(lǐng)域,發(fā)表的相關(guān)論文一一都證實了AGEs是老化、與老化相關(guān)的慢性疾病發(fā)生的重要影響因素。

 

上海恒遠生物科技有限公司晚期糖基化終端產(chǎn)物(AGEs)試劑盒*,提供技術(shù)指導。您的咨詢與訂購,:   手機    :何

 

   

葡萄糖來源的AGEs Glc-AGEsELISA試劑盒利用的是基于三明治原理的固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。如右圖所示,96孔板的表面有一層單克隆抗體涂層可直接識別樣品中Glc-AGEs的特異性抗原位點, 然后使用HRP標記的anti-AGE抗體結(jié)合Glc-AGEs形成三明治復合物,zui后酶顯色對樣品進行定性和定量研究。

   

人或其他動物的純化蛋白、血漿、血清和細胞裂解液。

    

(1) Antibody coated microtiter plate, 96 wells, 1 plate

(2) Glucose-derived AGEs standard, 250 uL×2

(3) Reference standard and sample diluent, 15 mL×1

(4) HRP- anti AGEs antibody concentrate(×100), 60 uL×1 (mouse monoclonal antibody)

(5) OPD (o-phenylendiamine) tablets, 2 tab.

(6) Substrate solution, 30 mL×1

(7) Stop solution, 15 mL×1

(8) Wash buffer concentrate (×20) , 30 mL×1

(9) Dilution plate, 1 plate

   

 

 

 

 

    

使用前確保wash buffer濃縮液內(nèi)無結(jié)晶顆粒,往30 ml的濃縮液內(nèi)加入570 ml去離子水即為工作液,此溶液可以保存在2-8zui多放14天。

抗體稀釋液

10倍體積的清洗液稀釋"Reference standard and sample diluent"即可。

   

用等體積"Reference standard and sample diluent" 稀釋"Glucose-derived AGEs standard"500ng/ml),如下圖所示,依次配成250, 125, 62.5, 31.25, 15.63, and 7.82 ng/ml的溶液。

HRP標記-AGEs

抗體(100×

5 ml 的抗體稀釋溶液稀釋50ul HRP-anti AGEs antibody濃縮液,稀釋后的抗體不能保存。

    

在使用前加1OPD tablet13 ml 底物溶液即可,此溶液需現(xiàn)配現(xiàn)用。

待測樣品的準備

"Reference standard and sample diluent"稀釋樣品,若樣品濃度非常高,需用PBS進行預稀釋,zui后再調(diào)整濃度至100×或更高。

 

   

1

96孔板準備

加入300 ul的清洗液至每個孔內(nèi),溫育30 min;*倒掉孔內(nèi)溶液后,再加入300ul 清洗液。再重復此步2次。

2

   應(yīng)

50 ul/的量加入標準溶液、稀釋樣品孵育1 hour,可以做兩個平行。孵育完成后吸去反應(yīng)液,用300 ul清洗液清洗3次。

3

   應(yīng)

50 ul/孔的100倍稀釋的HRP- anti AGEs antibody,孵育1 hour。孵育完成后吸去反應(yīng)液,用300 ul清洗液清洗3次。

4

       

100 ul/顯色液,孵育10 min

5

   應(yīng)

100ul/孔終止液終止酶顯色反應(yīng);

6

讀取吸光度

酶標儀在490 nm下讀取吸光值;

7

  結(jié) 

使用標準曲線計算出AGEs的濃度,使用4-Parameter Logistic Model分析數(shù)據(jù)。

 

聯(lián)


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