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上海恒遠為您特別分享:測定噬菌體滴度的方法

更新時間:2014-01-02   點擊次數(shù):1404次

    噬菌體在微生物界同樣存在類似動植物界的食物鏈一樣的關系,噬菌體滴度是如何測定的呢?再次與朋友見面就已經(jīng)是2014年了,我公司的跨年*也已經(jīng)圓滿的結束了,而現(xiàn)在才是新年的開始,購我公司產(chǎn)品立送精美臺歷一個哦!下面來看看今天上海恒遠為您特別分享:測定噬菌體滴度的方法

    在宿主細胞過量的情況下,噬斑的數(shù)量隨著噬菌體的增加呈線性增加。由于這個原因,在感染以前,要將噬菌體進行稀釋,而不是將宿主細胞稀釋。以低MOI(感染重復性)鋪板,也可確保每一個噬斑僅包含一個DNA。 

材料和試劑:
1、微波爐;
2、LB/IPTG/Xgal培養(yǎng) 板;
3、lb培養(yǎng)基;
4、頂層瓊脂糖凝膠。

操作步驟:
1、在5~10ml LB培養(yǎng)基中接種單個ER2537克隆,振搖孵育直至對數(shù)生長中期(OD600~0.5)。
2、在細胞生長時,微波融化頂層瓊脂糖凝膠,分裝至無菌培養(yǎng)管內,每管3ml。維持在45℃?zhèn)溆谩?br>3、37℃預熱LB/IPTG/Xgal培養(yǎng)板,備用。
4、以LB培養(yǎng)基10倍比稀釋噬菌體。
建議稀釋范圍:對擴增的噬菌體培養(yǎng)上清,108-1011;對未擴增的篩選洗脫液,101-104。每次稀釋都換用新的加樣槍頭,使用氣溶膠阻隔槍頭以避免交叉污染。
5、一旦ER2537培養(yǎng)物長至對數(shù)生長中期,分裝至微量離心管中,每管200ml。
6、將倍比稀釋的噬菌體上清加入含細菌培養(yǎng)物的微量離心管中,一支微量離心管中僅加入一種稀釋液10ml,快速渦旋,室溫孵育1-5min。
7、轉移至含有45℃頂層瓊脂糖凝膠的管中,快速渦旋混勻,立即傾倒至預熱的LB/IPTG/Xgal平板上,輕緩搖動平板使頂層膠均勻分布。
8、冷卻平板5min,37℃倒置培養(yǎng)過一個夜。
9、噬斑計數(shù)以噬斑數(shù)為100左右的平皿為準,噬斑數(shù)乘以稀釋度即可獲得每10ml噬菌體的滴度-噬斑形成單位(pfu)。

    朋友們,以上就是測定噬菌體滴度的方法啦,測定試驗過后記得把結果與心得記錄下來哦!這里是上海恒遠ELISA試劑盒供應商,感謝朋友們對我公司的支持!

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