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論實驗室環(huán)境要求達標的重要性

更新時間:2015-03-25   點擊次數(shù):1980次

實驗室的環(huán)境與操作結果及安全性有著不可分割的密切關系,要求工作環(huán)境清潔、空氣清新、干燥燥和無煙塵,今天我們就以細胞培養(yǎng)實驗為例,論實驗室環(huán)境要求達標的重要性。
一、常用設備
    1.超凈工作臺:也稱凈化工作臺,分為側流式,直流式和外流式三大類。
    2.無菌操作間:一般由更衣間,緩沖間和操作間三部分組成。操作間放置凈化工作臺及二氧化碳培養(yǎng)箱,離心機,倒置顯微鏡等。緩沖間可放置電冰箱,冷藏器及消毒好的無菌物品等。
    3.操作間:普通培養(yǎng)箱,離心機,水浴鍋,定時鐘,普通天平及日常分析處理物。
    4.洗刷消毒間:烤箱,消毒鍋,蒸餾水處理器及酸缸等。
    5.分析間:顯微鏡,計算機及打印機等。
二、合適的氣體環(huán)境 
    氣體是哺乳動物細胞培養(yǎng)生存必需條件之一,所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環(huán),產(chǎn)生供給細胞生長增殖的能量和合成細胞生長所需用的各種成分。開放培養(yǎng)時一般把細胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中。
    二氧化碳既是細胞代謝產(chǎn)物,也是細胞生長繁殖所需成分,它在細胞培養(yǎng)中的主要作用在于維持培養(yǎng)基的pH值。大多數(shù)細胞的適宜pH為7.2-7.4,偏離這一范圍對細胞培養(yǎng)將產(chǎn)生有害的影響。但細胞耐酸性比耐堿性大一些,在偏酸環(huán)境中更利于細胞生長。但有一些細胞也喜歡偏堿環(huán)境中生長,如成纖維細胞pH是7.4-7.6.每種細胞都有其zui適pH值。
三、細胞培養(yǎng)溫度 
    維持培養(yǎng)細胞旺盛生長,必須有恒定而適宜的溫度。不同種類的細胞對培養(yǎng)溫度要求也不同,人體細胞培養(yǎng)的標準溫度為36.5℃±0.5℃,偏離這一溫度范圍,細胞的正常代謝會受到影響,甚至死亡。培養(yǎng)細胞對低溫的耐受力較對高溫強,溫度上升不超過39℃時,細胞代謝與溫度成正比;人體細胞在39-40℃1小時,即能受到一定損傷,但仍有可能恢復;在40-41℃1小時,細胞會普遍受到損傷,僅小半數(shù)有可能恢復;41-42℃1小時,細胞受到嚴重損傷,大部分細胞死亡,個別細胞仍有恢復可能;當溫度在43℃以上1小時,細胞全部死亡。相反,溫度不低于0℃時,對細胞代謝雖有影響,但并無傷害作用;把細胞放入25-35℃時,細胞仍能生存和生長,但速度減慢;放在4℃數(shù)小時后,再回到37℃培養(yǎng),細胞仍能繼續(xù)生長。細胞代謝隨溫度降低而減慢。當溫度降至冰點以下時,細胞可因胞質(zhì)結冰受損而死亡。但是,如果向培養(yǎng)液中加入一定量的冷凍保護劑(二甲亞砜或甘油),可在深低溫下如-80℃或-196℃(液氮)長期保存。

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