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Elisa試劑盒抗原包被選擇

更新時間:2015-04-20   點(diǎn)擊次數(shù):1385次

Elisa試劑盒抗原包被選擇
   獸藥殘留檢測大部分藥物因分子量小,難于直接吸附于固相載體上,因此需要將小分子藥物經(jīng)過改造成合適的半抗原,再將半抗原與大分子的載體蛋白偶聯(lián)(通常是利用半抗原分子中含有一定數(shù)量的游離基團(tuán),如巰基、氨基、醛基、羧基、酮基、苯酚基、咪唑基等,這些基團(tuán)可與蛋白質(zhì)分了中的對應(yīng)基團(tuán)在偶聯(lián)劑的作用下發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)),從而形成半抗原-載體蛋白復(fù)合物,半抗原-載體蛋白復(fù)合物通過載體蛋白吸附到固相載體上,實現(xiàn)小分子藥物的包被過程。常用的載體蛋白有: 牛血清白蛋白(BSA) 、人血清白蛋白(HSA)、牛的免疫球蛋白(TRP)、雞的卵清蛋(OVA)、血藍(lán)蛋白(KLH)等。   

    臨床用于包被固相載體的抗原按其來源不同可分為天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原三大類。天然抗原可取自動物組織、微生物培養(yǎng)物等,須經(jīng)提取純化才能作包被用。如HBsAg可以從攜帶者的血清中提取,一般的細(xì)菌和病毒抗原可以從其培養(yǎng)物中提取,蛋白成份抗原可從富含此抗原的材料中提取等(例如AFP從臍帶血或胎肝中提?。V亟M抗原是抗原基因在質(zhì)粒體中表達(dá)的蛋白質(zhì)抗原,多以大腸桿菌或酵母菌為質(zhì)粒體。重組抗原的優(yōu)點(diǎn)是除工程菌成份外,其他雜質(zhì)少,而且無傳染性,但純化技術(shù)難度較大。以大腸桿菌為質(zhì)粒體的重組抗原如不能充分除大腸桿菌成份,用于ELISA,在反應(yīng)中可出現(xiàn)假陽性,因不少受檢者受大腸桿菌感染而在血清中存在抗大腸桿菌抗體。重組抗原的另一特點(diǎn)是能用基因工程制備某些無法從天然材料中分離的抗原物質(zhì)。例如丙型肝炎病毒(HCV)尚不能培養(yǎng)成功,而且丙肝病人血清中HCV抗原含量極微。目前檢測抗HCV ELISA中所用包被抗原大多為根據(jù)HCV的基因克隆表達(dá)而制備的重組抗原。在傳染病診斷中,不少重組抗原如HBsAg、HBeAg和HIV抗原等均在ELISA中取得應(yīng)用。合成多肽抗原是根據(jù)蛋白質(zhì)抗原分子的某一抗原決定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。多肽抗原一般只含有一個抗原決定簇,純度高,特異性也高,但由于分子量太小,往往難于直接吸附于固相上。多肽抗原的包被一般需先使其與無關(guān)蛋白質(zhì)如牛血清白蛋白質(zhì)(BSA)等偶聯(lián),借助于偶聯(lián)物與固相載體的吸附,間接地結(jié)合到固相載體表面。應(yīng)用多肽抗原的另一注意點(diǎn)為他僅能檢測與其相應(yīng)的抗體。一種蛋白質(zhì)抗原往往含有多個不同的能引起抗體產(chǎn)生的決定簇,因此在受檢血清中的其他抗體就不能與該多肽抗原發(fā)生反應(yīng)。另外,某些微生物發(fā)生變異時往往發(fā)生抗原結(jié)構(gòu)變化,在這種情況下,用個別多肽抗原進(jìn)行包被可引起其他抗體的漏檢。

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