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原代細(xì)胞凍存實(shí)驗(yàn)操作步驟

更新時(shí)間:2015-05-06   點(diǎn)擊次數(shù):1545次

原代細(xì)胞凍存實(shí)驗(yàn)操作步驟

1、選用生長(zhǎng)情況好,數(shù)量較多的原代細(xì)胞,凍存前一天換液一次。

2、貼壁細(xì)胞需用0.25%胰酶常規(guī)消化將細(xì)胞消化下來(lái),將細(xì)胞懸液收集至離心管中。

3、1000rpm離心5分鐘,棄上清液。

4、沉淀加含DMSO的培養(yǎng)液,計(jì)數(shù),調(diào)整至(1-10)×106 /ml。

5、將懸液分至凍存管中,每管1 ml。

6、密封凍存管,封口一定要嚴(yán),否則復(fù)蘇時(shí)易出現(xiàn)爆裂。

7、用記號(hào)筆標(biāo)明細(xì)胞種類,凍存日期。

8、按下列順序降溫:室溫→4(20分鐘〕冰箱冷凍室(30分鐘)→超低溫冰箱(-80℃guoye)→液氮。

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