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各種Elisa常用方法的優(yōu)勢劣勢對比

更新時間:2015-05-20   點擊次數(shù):2466次

我們知道,Elisa可分為多種類型測定,是一種廣泛應(yīng)用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術(shù)。 我公司技術(shù)部將各種Elisa常用方法的優(yōu)勢劣勢進行對比,結(jié)果如下:

一、直接法(direct Elisa)

    將抗原直接固定在固相載體上,加入酶標記的一級抗體,即可測定抗原總量,此一級抗體的特異性非常重要。

    1.優(yōu)勢:操作手續(xù)簡短,因無須使用二抗可避免交互反應(yīng)。

    2.劣勢:試驗中的一抗都得用酶標記,但不是每種抗體都適合做標記,費用相對提高。

二、間接法(indirect Elisa)

    此測定方法與直接法類似,差別在于一級抗體沒有酶標記,改用酶標記的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。

    1.優(yōu)勢:二抗可以加強信號,而且有多種選擇能做不同的測定分析。不加酶標記的一級抗體則能保留它zui多的免疫反應(yīng)性。

    2.劣勢:交互反應(yīng)發(fā)生的機率較高。

三、雙抗體夾心法(sandwich Elisa)

    被檢測的抗原包被在兩個抗體之間,其中一個抗體將抗原固定于固相載體上,即捕捉抗體。另一個則是檢測抗體,此抗體可用酶標記后直接測定抗原的量;或不標記,再透過酶標記的二級抗體來測定抗原的量。這兩種抗體必須小心選取,才可避免交互反應(yīng)或競爭相同的抗原結(jié)合部位。

    1.優(yōu)勢:高靈敏、高專一性,抗原無須事先純化。

    2.劣勢:抗原一定得擁有兩個以上的抗體結(jié)合部位。

四、競爭法(competitive Elisa)

    樣本里的抗原(自由抗原)和純化并固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一起競爭相同的抗體,當(dāng)樣品里的自由抗原越多,就可以結(jié)合越多的抗體,而固定抗原就只能結(jié)合到較少的抗體,反之亦然。經(jīng)清洗步驟,洗去自由抗原和抗體的復(fù)合物,只留下固定抗原和抗體的復(fù)合物,拿來與只有固定抗原的對照組結(jié)果相比較,根據(jù)呈色差異就可計算出樣品里的抗原含量。

    1.優(yōu)勢:可適用比較不純的樣本,而且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。

    2.劣勢:整體的敏感性和專一性都較差。

五、ELISA技術(shù):基于細胞法(cell-based Elisa)

    是一種新的定性蛋白檢測技術(shù),將細胞直接在微孔板里培養(yǎng),待檢測時,不需抽提蛋白和裂解細胞,便可直接測量微孔板里蛋白經(jīng)刺激或抑制作用后的變化。

    1.優(yōu)勢:無需裂解細胞,所以目標蛋白損失zui少,可測定完整細胞、黏附細胞、還有非粘附細胞。

    2.劣勢:不能測定抗原量。

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