實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作是非常重要的,操作者需要在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之前將所需材料準(zhǔn)備齊全。在ELISA試劑盒操作中,像蒸餾水、加樣器、振蕩器、磁力攪拌器等材料需自備,今天上海恒遠(yuǎn)來(lái)和您說(shuō)說(shuō)這其中*的九種試劑:
1. 稀釋液
2. ABTS使用液
3. 抗原、抗體和酶標(biāo)記抗體
4. 正常人血清和陽(yáng)性對(duì)照血清
5. 終止液(2M H2SO4)
6. 底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸)
7. 包被緩沖液(PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液)
8. 洗滌緩沖液(PH7.4 PBS):0.15M
9. TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液
上面說(shuō)的九種試劑是試劑盒之外的,試劑盒內(nèi)的洗滌緩沖液(50×)需要蒸餾水50倍稀釋?zhuān)瑯?biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋?xiě)?yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備,不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行:
0 pg/ml | 空白對(duì)照 | 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul |
12.5 pg/ml | 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
25 pg/ml | 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
50 pg/ml | 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
100 pg/ml | 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
200 pg/ml | 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
400 pg/ml | 6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul |
ELISA是一種免疫測(cè)定,應(yīng)用免疫學(xué)技術(shù)測(cè)定標(biāo)本的方法??捎米鱁LISA測(cè)定的標(biāo)本十分廣泛,體液、分泌物和排泄物等均可作標(biāo)本以測(cè)定其中某種抗體或抗原成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行ELISA試劑盒操作測(cè)定,有些則需經(jīng)預(yù)處理。