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Elisa標(biāo)準(zhǔn)曲線做不好的原因分析

更新時(shí)間:2017-07-07   點(diǎn)擊次數(shù):6655次

    上周青島農(nóng)業(yè)大學(xué)徐老師在我公司購(gòu)買了相應(yīng)的抗體自己包被Elisa試劑盒。由于徐老師是位實(shí)驗(yàn)新手,剛剛接觸Elisa實(shí)驗(yàn),研究大鼠干擾素相關(guān)指標(biāo)的實(shí)驗(yàn),做完大鼠γ干擾素Elisa實(shí)驗(yàn)后反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線的梯度都不好。剛加完顯色劑的時(shí)候梯度還算明顯,但是顯色比較淺,隨著時(shí)間延長(zhǎng)(大概6、7分鐘)以后梯度就不明顯了。終止反應(yīng)后測(cè)得的值梯度就沒有了。
   

    為此,我公司技術(shù)員對(duì)Elisa標(biāo)準(zhǔn)曲線做不好的原因做出分析:
    1.剛加完顯色劑時(shí)梯度明顯:顯色液可能是從高濃度向低濃度孔加的。
    2.酶濃度太高,導(dǎo)致zui后顯色結(jié)果都是高的。
    3.包被-酶標(biāo)系統(tǒng)不匹配或者酶標(biāo)的非特異反應(yīng)太強(qiáng),或者酶標(biāo)儀讀數(shù)范圍不夠。
    4.樣本中有能夠催化底物的物質(zhì),沒洗下來。
    5.建議:包被、酶標(biāo)重新做梯度,先用較低的濃度把梯度摸索好,然后再優(yōu)化靈敏度,zui后調(diào)出所需的靈敏度、線性范圍
    6.有條件的話,可以把酶免的蛋白系統(tǒng)移植到板式化學(xué)發(fā)光上,加完底物三分鐘讀數(shù)。
    7.蛋白系統(tǒng)靈敏度夠的話,顯色十分鐘就差不多了。
    8.酶是自己標(biāo)的這種情況的,HRP比例不要太高。
   

    問題解決后,徐老師對(duì)我公司試劑盒的售后服務(wù)非常滿意,并表示下學(xué)期會(huì)有新的實(shí)驗(yàn)課題,直接買我公司的進(jìn)口品牌Elisa試劑盒。非常感謝青島農(nóng)業(yè)大學(xué)徐老師對(duì)上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司的支持與信賴。

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