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ELISA技術(shù)講座的五大重要點(diǎn)

更新時(shí)間:2017-11-09   點(diǎn)擊次數(shù):2697次

    已經(jīng)普遍到數(shù)大學(xué)實(shí)驗(yàn)室的ELISA技術(shù),有著重復(fù)性穩(wěn)定及吸附性能好等特點(diǎn)。今天上海恒遠(yuǎn)給大家?guī)?lái)了相關(guān)實(shí)驗(yàn)講座,ELISA試劑盒的五大重要點(diǎn)分析。
 

1. 靈敏度的要求
    根據(jù)我公司技術(shù)人員的分析:如果待測(cè)樣本中目標(biāo)蛋白的濃度比較高,則對(duì)靈敏度要求相對(duì)小一些。如果待測(cè)樣本中目標(biāo)蛋白的濃度比較低,則必須考慮靈敏度的問(wèn)題。試劑盒曲線上的zui小濃度是比較準(zhǔn)確的,低于這個(gè)值因?yàn)榕c曲線是個(gè)“S”型結(jié)構(gòu)有關(guān),所以結(jié)果是有偏差的,是一種估算。再加上實(shí)驗(yàn)誤差,所以達(dá)不到理想的效果。建議選擇試劑盒時(shí),應(yīng)該看曲線上zui小的濃度值,而不是試劑盒上寫的靈敏度。

 

2. 標(biāo)本復(fù)查
    ELISA手工檢測(cè)過(guò)程復(fù)雜,影響因素較多,即使室內(nèi)質(zhì)控在控,也可能因孔間差異而造成結(jié)果的差異,因此加大復(fù)查力度是保證結(jié)果準(zhǔn)確性的可靠方法,可疑、弱陽(yáng)性標(biāo)本及少見模式的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行復(fù)查。
3. 灰區(qū)的設(shè)置
    通常情況下,ELISA定性實(shí)驗(yàn)以“陽(yáng)性”和“陰性”來(lái)報(bào)告結(jié)果,兩者間有一條分界線被稱為“陽(yáng)性判斷值”(cut-off value,CO值),這是定性免疫測(cè)定結(jié)果報(bào)告的依據(jù)。
    
4. 測(cè)試過(guò)程請(qǐng)注意:
   ① 建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照都做雙份檢測(cè),取平均值,以減小實(shí)驗(yàn)誤差。
   ② 試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,不同批號(hào)的試劑不得混用。
   ③ 實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行,實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
   ④ 酶標(biāo)包被板開封后如未用完,應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

 

5. 常用的表示結(jié)果方法
   ① 定性測(cè)定
   ② 半定量測(cè)定,結(jié)果一般以滴度表示。
   ③ 定量測(cè)定,即用已知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋后進(jìn)行ELISA測(cè)定,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果以量或單位表示。在ELISA定量檢測(cè)中每一塊反應(yīng)板都必須繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

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