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如何巧妙利用血清培養(yǎng)細(xì)胞

更新時(shí)間:2018-10-17   點(diǎn)擊次數(shù):1128次

    在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室中,血清是常見(jiàn)的科研試劑之一,常見(jiàn)的血清種屬有人的和動(dòng)物兩種,而動(dòng)物的又分為牛、豬、雞、羊等,根據(jù)客戶(hù)對(duì)產(chǎn)品種屬與來(lái)源的選擇,價(jià)格也是不同的。對(duì)于實(shí)驗(yàn)新手來(lái)說(shuō),稍有不慎就會(huì)影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果,甚至讓花費(fèi)幾千元買(mǎi)來(lái)的血清失去效果。那么我們要如何正確的使用與操作呢?今天上海恒遠(yuǎn)錢(qián)經(jīng)理與您探討“如何巧妙利用血清培養(yǎng)細(xì)胞”。


    我們今天要說(shuō)的血管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)采用的是貼塊法,這種方法具有獲得平滑肌細(xì)胞純度高,量多,操作簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)。但用貼塊法易使平滑肌細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)肌絲喪失,亞細(xì)胞器增加。 
        
    操作方法:動(dòng)物經(jīng)頸動(dòng)脈放血后,在無(wú)菌操作下迅速取出胸腹主動(dòng)脈段,置于含Hank's液的平皿中漂洗3次,將凝塊洗干凈后剝除外膜的纖維脂肪層,然后縱行切開(kāi)血管,刮除內(nèi)膜即內(nèi)皮細(xì)胞迅速撕下中膜內(nèi)、中層,切成約1mm寬的小條,浸泡在含血清的Hank's液中,并將撕下小組織塊種植于培養(yǎng)瓶壁。置于37℃恒溫箱,2h左右,取出培養(yǎng)瓶加入20%胎牛血清的培養(yǎng)液,再放回培養(yǎng)箱內(nèi)靜止培養(yǎng)4天。4天后可見(jiàn)細(xì)胞從組織中遷移游出。


    在這方法中,大家可要注意啦!不同動(dòng)物血管結(jié)構(gòu)有差異,豬和猴較易操作,但小動(dòng)物如兔、鼠因其血管小,血管壁薄等特點(diǎn),使之難以分離。另外組織塊太薄,不易粘附培養(yǎng)基,也使細(xì)胞較難生長(zhǎng)。


上海恒遠(yuǎn)特別提示,實(shí)驗(yàn)中請(qǐng)注意:
1. 根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞的種屬加入適量的不同血清,一般可加入胎牛血清,若小牛血清增殖效果差,應(yīng)加胎牛血清(FBS),通常濃度為10%~20%。
2. 培養(yǎng)基的選擇:常用的有DMEM,M199培養(yǎng)基。培養(yǎng)兔的平滑肌細(xì)胞用DMEM效果較好。
3. 種植組織塊的數(shù)目,如75cm2的長(zhǎng)頸瓶組織塊不得少于30。 

 

    上海恒遠(yuǎn)是國(guó)內(nèi)高品質(zhì)血清供應(yīng)商,提供GIBCO、HyClone、NQBB、SIGMA等品牌血清產(chǎn)品,保證,保證質(zhì)量!咨詢(xún)采購(gòu),歡迎您聯(lián)系我公司業(yè)務(wù)員。

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