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如何解決ELISA檢測試劑盒的“花板”問題

更新時間:2019-10-25   點擊次數(shù):1000次

ELISA檢測試劑盒吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體,適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型。“花板”問題是ELISA檢測試劑盒比較常見的一個問題,那么客戶在遇到這類問題時,該如何處理呢?

在ELISA檢測試劑盒結(jié)果"花板"的這一問題中,對檢測數(shù)據(jù)造成很大影響,往往會使檢測者做出誤判,是實驗中必須要注意和避免的。針對這個問題,我們建議從以下幾點出發(fā):

一、標(biāo)本/試劑/儀器

1.標(biāo)本:出入境人員的血液標(biāo)本。

2.試劑:HBsAg、HCV、HIV、梅毒試劑均為不同廠家的ELISA檢測試劑盒。

3.儀器:腦心機(jī),洗板機(jī),酶標(biāo)儀。

二、方法。所有被檢出入境人員的血液標(biāo)本,按照各個廠家提供的ELISA檢測試劑盒說明書進(jìn)行HBsAg-HCV-HIV梅毒等檢驗項目操作。所有試劑均在有效期內(nèi)使用。

三、結(jié)果。所使用不同廠家的試劑有時會出現(xiàn)“花板”問題。

四、分析

在所有標(biāo)本進(jìn)行檢測的過程中,所用的儀器及加樣過程都處于正常狀態(tài)的情況下,步驟均按照各種試劑說明書的要求去做,排除實驗所用儀器和操作步驟對實驗結(jié)果的影響外,ELISA檢測試劑盒內(nèi)的空白、陰性和陽性對照以及室內(nèi)質(zhì)控值都很正常,只有檢測的血液標(biāo)本情況異常。根據(jù)國家和疾控中心報告陽性率的比例不應(yīng)該是很高的情況下,HBsAg在用Elisa之前都經(jīng)過了快速金標(biāo)試劑的檢測,陽性標(biāo)本得到了一定的控制。因此,原因可能是在標(biāo)本的處理,特別是放置時間、離心速度和離心時間方面的問題。所以,標(biāo)本的處理就成為實驗結(jié)果的主要可疑因素。

為了避免“花板”現(xiàn)象的出現(xiàn),降低檢測的假陽性率,獲取準(zhǔn)確的實驗結(jié)果,小編建議應(yīng)選擇靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好、批間差小、操作方便省時的ELISA檢測試劑盒。

另外,小編再介紹下ELISA檢測試劑盒血清標(biāo)本的保存建議:

1.樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染,一則細(xì)菌的生長,其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。

2.血清標(biāo)本如是以無菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,ELISA如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長時間保存,應(yīng)在-70℃以下。

3.冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果。此外,凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意,不要進(jìn)行劇烈振蕩,反復(fù)顛倒混勻即可。

4.標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時,應(yīng)離心沉淀后取上清檢測。

5.要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),其有類似過氧化物的活性,因此,在以HRP為標(biāo)記酶的測定中,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。

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