久久久久久av无码免费网站下载,一本加勒比hezyo无码资源网,久久久久黑人强伦姧人妻,好爽毛片一区二区三区四

技術(shù)文章您現(xiàn)在的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > western blot 常見問題及解決辦法

western blot 常見問題及解決辦法

更新時間:2019-10-29   點(diǎn)擊次數(shù):2279次

     我們在做WB時zui常遇到的問題也是驚人的相似——樣品漂浮、蛋白條帶扭曲(無法準(zhǔn)確判斷蛋白分子量)、轉(zhuǎn)膜后看不到帶藍(lán)色或橙色的指示條帶、抗體孵育不均勻?qū)е缕毓舛炔町惡艽螅ㄒ廊皇菚绊懙降鞍妆磉_(dá)量的估算)。

     這些問題其實(shí)都或多或少與樣品前處理有關(guān)。也就是說,我們*可以通過優(yōu)化樣品處理手法,以及經(jīng)驗(yàn)累積,來獲得的WB結(jié)果。

     1.出現(xiàn)樣品漂浮怎么辦??

     原因分析:樣品中含有未除凈的溶劑或雜質(zhì),其密度比電泳緩沖液小

     解決辦法:處理組織或菌體時,需充分分散或裂解,確保目的蛋白盡可能的釋放;
     熱處理粗樣時,確保升溫迅速,并且金屬浴或水溫的實(shí)際溫度達(dá)到100℃(在海拔較高處水的沸騰不能確保溫度);
     離心的轉(zhuǎn)速和時間足夠;
     吸取上清液時盡量不要碰到中間層

     2.蛋白條帶出現(xiàn)扭曲怎么辦?

     原因分析:分離膠的濃度與蛋白分子量不對應(yīng);灌膠時間過長或過短,導(dǎo)致丙烯酰胺的交聯(lián)度不均勻

     解決辦法:根據(jù)目的蛋白的分子量選擇正確的分離膠濃度;
制備分離膠與濃縮膠時,應(yīng)保證緩沖液母液的正確稀釋,以及各組分的充分混勻(僅用移液器吹吸是不夠的,可以迅速用磁力攪拌器進(jìn)行混勻)

     3.轉(zhuǎn)膜后沒有指示條帶怎么辦?

     原因分析:如果此時SDS-PAGE膠上也沒有指示劑,則表明轉(zhuǎn)膜時間過長,蛋白穿膜(此時就沒有再繼續(xù)做下去的必要了)

     解決辦法:注意控制轉(zhuǎn)膜時間;
電泳液反復(fù)使用也可能導(dǎo)致轉(zhuǎn)膜失敗

     4.抗體孵育不均勻怎么辦?

     原因分析:孵育時振蕩搖床轉(zhuǎn)速過快,或是混勻直徑不夠,導(dǎo)致孵育不充分或不均勻

     解決方法:確保搖床可以在50 rpm穩(wěn)定運(yùn)行;選擇振蕩直徑在5~10 mm范圍內(nèi)的搖床

聯(lián)


免费少妇a级毛片| 欧美老熟妇乱xxxxx| 国产色无码精品视频国产| 欧美日韩中文国产一区| 无码国产精成人午夜视频一区二区| 中文无码精品一区二区三区| 77777亚洲午夜久久多人| 欧美顶级metart裸体全部自慰| 无码熟妇人妻av在线网站| 国产一区二区三区不卡av| 亚洲日韩在线中文字幕综合| 综合色就爱涩涩涩综合婷婷| 欧美性色欧美a在线播放| 丁香色欲久久久久久综合网| 精品国产三级a∨在线| 日产亚洲一区二区三区| 精品丝袜人妻久久久久久| 色一情一乱一伦一视频免费看 | 狠狠躁日日躁夜夜躁2022麻豆| 国产精品久久久久久久久岛| 少妇高潮尖叫黑人激情在线| 中文字幕精品一二三四五六七八| 国产精品美女www爽爽爽视频| 国产精品久久久久久久久鸭| 99久久人妻精品免费二区| 精品人妻一区二区三区四区在线| 日本真人边吃奶边做爽动态图| 中文字幕丰满乱子伦无码专区| 玩弄丰满奶水的女邻居| www国产精品内射| 久久天堂av综合合色蜜桃网| 日本午夜精品一区二区三区电影| 国产精品无码av无码| 大地资源在线观看免费下载| 影音先锋人妻啪啪av资源网站| 久久天天躁狠狠躁夜夜网站| 亚洲香蕉成人av网站在线观看| 国产激情无码一区二区三区| 先锋影音最新色资源站| 亚洲成av人片一区二区| 躁躁躁日日躁|