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幾個(gè)問(wèn)題幫你了解細(xì)胞培養(yǎng)FAQ

更新時(shí)間:2020-08-26   點(diǎn)擊次數(shù):1282次

1.細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí), 是否應(yīng)馬上去除DMSO? 
除少數(shù)特別注明對(duì)DMSO 敏感之細(xì)胞外,絕大部分細(xì)胞株(包括懸浮性細(xì)胞),在解凍之后,應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中,待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可,如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)或貼附之問(wèn)題。 

2.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基? 
不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細(xì)胞大都無(wú)法立即適應(yīng),造成細(xì)胞無(wú)法存活。 

3.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類? 
不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源,所以血清的種類和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極da的影響。來(lái)自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無(wú)法存活。 

4.懸浮性細(xì)胞應(yīng)如何繼代處理? 
一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中,稀釋細(xì)胞濃度即可,若培養(yǎng)液太多時(shí),可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高,直到無(wú)法容納為止。分瓶時(shí)取出一部份含細(xì)胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶,加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當(dāng)濃度,重復(fù)前述步驟即可。 

5.欲將一般動(dòng)物細(xì)胞離心下來(lái),其離心速率應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速? 
欲回收動(dòng)物細(xì)胞,其離心速率一般為300xg (約1,000rpm),5 - 10 分鐘,過(guò)高之轉(zhuǎn)速,將造成細(xì)胞死亡。 

6.細(xì)胞之接種密度為何? 
依照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之接種密度或稀釋分盤(pán)之比例接種即可。細(xì)胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)之一重要原因。 

7.細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基之成份為何? 
動(dòng)物細(xì)胞冷凍保存時(shí)經(jīng)常使用的冷凍培養(yǎng)基是含5 - 10 %DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95 % 原來(lái)細(xì)胞生長(zhǎng)用之新鮮培養(yǎng)基均勻混合之。注意:由于DMSO 稀釋時(shí)會(huì)放出大量熱能,故不可將DMSO 直接加入細(xì)胞液中,必須使用前先行配制完成。 

8.為何培養(yǎng)基保存于4 °C 冰箱中, 顏色會(huì)偏暗紅色, 且pH值會(huì)越來(lái)越偏堿性? 
培養(yǎng)基保存于4 °C 冰箱中,培養(yǎng)基內(nèi)之CO2 會(huì)逐漸溢出,造成培養(yǎng)基越來(lái)越偏堿性。而培養(yǎng)基中之酸堿指示劑(通常為phenol red)的顏色也會(huì)隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿之結(jié)果,將造成細(xì)胞生長(zhǎng)停滯或死亡。若培養(yǎng)基偏堿時(shí),可以通入無(wú)菌過(guò)濾之CO2,以調(diào)整pH 值。 

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