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幾個問題幫你了解細胞培養(yǎng)FAQ

更新時間:2020-08-26   點擊次數(shù):939次

1.細胞冷凍管解凍培養(yǎng)時, 是否應馬上去除DMSO? 
除少數(shù)特別注明對DMSO 敏感之細胞外,絕大部分細胞株(包括懸浮性細胞),在解凍之后,應直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中,待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可,如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題。 

2.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基? 
不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細胞大都無法立即適應,造成細胞無法存活。 

3.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類? 
不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極da的影響。來自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。 

4.懸浮性細胞應如何繼代處理? 
一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中,稀釋細胞濃度即可,若培養(yǎng)液太多時,可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高,直到無法容納為止。分瓶時取出一部份含細胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶,加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當濃度,重復前述步驟即可。 

5.欲將一般動物細胞離心下來,其離心速率應為多少轉(zhuǎn)速? 
欲回收動物細胞,其離心速率一般為300xg (約1,000rpm),5 - 10 分鐘,過高之轉(zhuǎn)速,將造成細胞死亡。 

6.細胞之接種密度為何? 
依照細胞株基本數(shù)據(jù)上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可。細胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長之一重要原因。 

7.細胞冷凍培養(yǎng)基之成份為何? 
動物細胞冷凍保存時經(jīng)常使用的冷凍培養(yǎng)基是含5 - 10 %DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95 % 原來細胞生長用之新鮮培養(yǎng)基均勻混合之。注意:由于DMSO 稀釋時會放出大量熱能,故不可將DMSO 直接加入細胞液中,必須使用前先行配制完成。 

8.為何培養(yǎng)基保存于4 °C 冰箱中, 顏色會偏暗紅色, 且pH值會越來越偏堿性? 
培養(yǎng)基保存于4 °C 冰箱中,培養(yǎng)基內(nèi)之CO2 會逐漸溢出,造成培養(yǎng)基越來越偏堿性。而培養(yǎng)基中之酸堿指示劑(通常為phenol red)的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿之結(jié)果,將造成細胞生長停滯或死亡。若培養(yǎng)基偏堿時,可以通入無菌過濾之CO2,以調(diào)整pH 值。 

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