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ELISA加樣時為何要避免氣泡的原因以及避免方法介紹

更新時間:2021-03-01   點擊次數(shù):3867次

    相信大家在很多說明書或教科書上都看到過這樣的一條提示,就是加樣時要避免出現(xiàn)氣泡,這到底是什么原因呢?因為在做實驗的過程中,有時為了打干凈槍頭里面的液體,很容易產(chǎn)生氣泡,這樣對實驗結(jié)果會產(chǎn)生什么影響呢?

 
1.通常氣泡都是聚集在酶標(biāo)板的孔周圍,導(dǎo)致孔中液體不能與孔壁有效接觸,使
2.孔內(nèi)反應(yīng)不均一。
3.包被時有氣泡的話,將導(dǎo)致包被不*實際包被量下降--弱陽性甚至假陰性。
4.封閉時有氣泡的話,將導(dǎo)致大量未結(jié)合位點的存在,引起非特異性結(jié)合--本底增高,假陽性。
5.加樣時有氣泡的話,抗原抗體不能有效的結(jié)合--弱陽性甚至假陰性。
6.加二抗時有氣泡的話,抗原抗體不能有效的結(jié)合--弱陽性甚至假陰性(競爭法相反----假陽性)。
7.加顯色液時有氣泡的話---顯色不*。
8.加終止液時有氣泡的話(1、不能*終止反應(yīng) 2、影響酶標(biāo)儀比色,OD值增高)
9.洗滌時有氣泡的話,非特異性結(jié)合物不能*洗去,做無用功。
 
避免方法:
1、加樣時盡量靠近孔底(不要接觸孔底),用力均勻,不要過快過猛。
2、封閉時一定要加滿孔,
3、洗滌時一定要加滿孔(重要),氣泡會浮上來終驅(qū)除。手工洗板時一定要吸干水分并用力拍干。
 
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