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你真的會(huì)培養(yǎng)細(xì)胞嗎?這些地方要注意了

更新時(shí)間:2021-03-02   點(diǎn)擊次數(shù):1294次

       

     細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)又叫細(xì)胞克隆技術(shù)。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)指的是細(xì)胞在體外條件下的生長(zhǎng),在培養(yǎng)的過程中細(xì)胞不再形成組織(動(dòng)物),今天的文章中跟大家介紹一些關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)知識(shí)!

一.細(xì)胞培養(yǎng)的基本概念
     體外培養(yǎng)(in vitro culture)包括所有結(jié)構(gòu)層次的培養(yǎng),即:組織培養(yǎng)(tissue culture)、細(xì)胞培養(yǎng)(cell culture)和器官培養(yǎng)(organ culture)。
細(xì)胞培養(yǎng)(Cell culture)指從生物機(jī)體取出部分組織分散成單個(gè)細(xì)胞或直接從機(jī)體取出單個(gè)細(xì)胞,也可把體外培養(yǎng)細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞在體外條件下培養(yǎng),細(xì)胞能繼續(xù)存活與增殖。
 
二細(xì)胞培養(yǎng)目的與用途
1、科學(xué)研究
(1)藥物研究開發(fā),如新藥篩選,疫苗、基因工程藥物、細(xì)胞工程藥物研究與開發(fā)、單克隆抗體制備等。
(2)基礎(chǔ)研究,如藥物作用機(jī)理、基因功能、疾病發(fā)生機(jī)理等研究。
2、生物制藥
(1)疫苗生產(chǎn):如病毒性疫苗(肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等),多肽疫苗(腫瘤疫苗)等。
(2)基因工程藥物生產(chǎn):如EPO等。
(3)抗體藥物、基因治療藥物生產(chǎn)。
(4)細(xì)胞工程藥物生產(chǎn):生物細(xì)胞內(nèi)的一些生物活性多肽,生物活性物質(zhì)等。
(5)利用細(xì)胞法體外測(cè)定生物活性物質(zhì)的活性;并預(yù)測(cè)其在體內(nèi)的藥效和替代體內(nèi)法檢測(cè)其成品的生物活性。
 
三 原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)
       原代培養(yǎng)(primary culture):將動(dòng)物機(jī)體的各種組織從機(jī)體中取出,經(jīng)各種酶(常用胰蛋白酶)、螯合劑(常用EDTA)或機(jī)械方法處理,分散成單細(xì)胞,置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),使細(xì)胞得以生存、生長(zhǎng)和繁殖,這一過程稱原代培養(yǎng)。
 但實(shí)際上,通常把第yi代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。
傳代培養(yǎng)(subculture):細(xì)胞在培養(yǎng)器皿中生長(zhǎng)一定時(shí)間后,被分開接種到新的培養(yǎng)器皿中。
     當(dāng)原代培養(yǎng)成功以后,隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)和細(xì)胞不斷分裂,一則細(xì)胞之間相互接觸而發(fā)生接觸性抑制,生長(zhǎng)速度減慢甚至停止;另一方面也會(huì)因營(yíng)養(yǎng)物不足和代謝物積累而不利于生長(zhǎng)或發(fā)生中毒。此時(shí)就需要將培養(yǎng)物分割成小的部分,重新接種到另外的培養(yǎng)器皿(瓶)內(nèi),再進(jìn)行培養(yǎng)。
 對(duì)單層培養(yǎng)而言,80%匯合或剛匯合的細(xì)胞是較理想的傳代階段。
 
四.體外培養(yǎng)細(xì)胞的方式
      群體培養(yǎng)(mass culture),將含有一定數(shù)量細(xì)胞的懸液置于培養(yǎng)瓶中,讓細(xì)胞貼壁生長(zhǎng),匯合(confluence)后形成均勻的單細(xì)胞層;
克隆培養(yǎng)(clonal culture),將高度稀釋的游離細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,各個(gè)細(xì)胞貼壁后,彼此距離較遠(yuǎn),經(jīng)過生長(zhǎng)增殖每一個(gè)細(xì)胞形成一個(gè)細(xì)胞集落,稱為克?。╟lone)。一個(gè)細(xì)胞克隆中的所有細(xì)胞均來源于同一個(gè)祖先細(xì)胞。

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