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你知道樣本怎么處理嗎?

更新時間:2022-10-17   點(diǎn)擊次數(shù):669次

血清:將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置0.5-2小時或4℃過夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

 

血漿:EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-81000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mLPBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?span style="font-size: 16px; font-family: Calibri;">-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

 

細(xì)胞裂解液: 吸棄培養(yǎng)液,用PBS0.01 M,pH 7.4)將細(xì)胞洗一遍。用細(xì)胞刮刮下細(xì)胞(不能用胰酶和EDTA 處理),加入2-5 mL PBS0.01 M,pH 7.4)。懸浮細(xì)胞可省略。收集細(xì)胞懸液,41000×g離心10min,棄去培養(yǎng)基,用預(yù)冷的PBS潤洗3次。加入適量的預(yù)冷PBS或非變性細(xì)胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細(xì)胞,通常6孔板一個孔的細(xì)胞量需要150-250μL PBS重懸。 將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,反復(fù)凍融3次,使細(xì)胞充分裂解,也可將樣品進(jìn)行超聲破碎,以達(dá)到裂解的目的。410000×g 離心10min,除去細(xì)胞碎片,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

 

細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

 

樣本保存和穩(wěn)定性:

樣本在2-8℃條件下,可以儲存72h,在- 20℃或-80℃可以儲存6個月及以上。樣本收集后,不是一次檢測完,請按一次用量分裝凍存,避免反復(fù)凍融。


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