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ELISA實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)異常的原因分析

更新時(shí)間:2023-03-20   點(diǎn)擊次數(shù):735次


ELISA實(shí)驗(yàn)是我們大家最常見(jiàn)的實(shí)驗(yàn),也是比較容易出問(wèn)題的實(shí)驗(yàn),可能你一不小心,你的整個(gè)實(shí)驗(yàn)便是無(wú)功能重來(lái)那!所以小編給您講解在使用ELISA試劑盒做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候,有些細(xì)節(jié)若是做不好會(huì)出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)異常,或者效果不佳,那么你有想過(guò)是什么原因嗎?

 

一、白板異常:顯色步驟結(jié)束后,酶標(biāo)板所有孔均無(wú)顏色。陽(yáng)性對(duì)照不顯色。

 

1. 試劑已過(guò)效期,或不同試劑盒組分混用(解決方式:檢查試劑的組分及批號(hào),確認(rèn)未過(guò)期以及所有組分均屬對(duì)應(yīng)的試劑盒。不同試劑盒或不同批號(hào)的試劑不能混用)。

 

2. 錯(cuò)加、漏加試劑底物、顯色劑 A或B(解決方式:嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)的步驟操作,加完試劑后可觀察一下液面高度是否一致,以減少漏加現(xiàn)象)。

 

3. 洗板及加樣過(guò)程中,酶標(biāo)受污染失活失去催化顯色劑顯色的能力(解決方式:確認(rèn)盛酶標(biāo)的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等,確認(rèn)配制洗液的容器已洗干凈)。

 

4. 終止液誤作洗滌液稀釋或當(dāng)?shù)孜锞彌_液配制(解決方式:每次配制時(shí)都應(yīng)看清標(biāo)簽標(biāo)明物質(zhì))。5. 蒸餾水有問(wèn)題(解決方式:確認(rèn)配制洗液的純化水達(dá)到要求且未污染,與好蒸餾水比較)?!わ@色弱、靈敏度低:實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,包括陽(yáng)性對(duì)照、質(zhì)控在內(nèi)的所有板孔顏色均較淡。

 

二、陰陽(yáng)性對(duì)照正常,但質(zhì)控、參考品或個(gè)別弱陽(yáng)性標(biāo)本未能檢出。

 

1. 未達(dá)要求的孵育溫度及孵育時(shí)間可檢出強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本,但質(zhì)控或弱陽(yáng)性標(biāo)本受 溫度變化影響較大而被未檢出(解決方式:質(zhì)控品或標(biāo)本避免反復(fù)凍融。標(biāo)本在一周內(nèi)使用的,可存于 2-8℃,如需長(zhǎng)期保存,應(yīng)置于-20℃以下保存。質(zhì)控品應(yīng)小量分裝,并置于-20℃以下保存)。

 

2. 質(zhì)控品或標(biāo)本高溫放置過(guò)久,或被反復(fù)凍融致待測(cè)物滴度下降,而未能檢出(解決方式:重新設(shè)定酶標(biāo)儀的參數(shù),特別是檢查濾光片是否匹配)。

 

3. 儀器設(shè)定不正確,濾光片不匹配(解決方式:重新設(shè)定酶標(biāo)儀的參數(shù),特別是檢查濾光片是否匹配)。

 

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,陰陽(yáng)性對(duì)照正常,質(zhì)控正常,但臨床標(biāo)本感覺(jué)顯色較弱

 

1. 待測(cè)標(biāo)本中可能不含強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本,故結(jié)果可能是正常的(解決方式:如有懷疑,可復(fù)檢)。

 

2. 標(biāo)本加入疊氮鈉作為防腐劑(解決方式:酶免實(shí)驗(yàn)中的標(biāo)本禁用疊氮鈉作為防腐劑,可選用 proclin、硫柳汞等其他防腐劑)。


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