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ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)靈敏度高的原因

更新時(shí)間:2023-03-27   點(diǎn)擊次數(shù):481次


ELISA試劑盒試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給同行帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。

 

ELISA試劑盒試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因及解決辦法分析:

 

1 選擇試劑

 

選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

 

2 加樣可能原因:

 

1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;

 

2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí));

 

3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。

 

ELISA試劑盒解決辦法:

 

1) 標(biāo)本為血清:最好將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。

 

2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。

 

3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。

 

4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,最好選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。

 

5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。

 

3 孵育可能原因:

 

1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗che底;

 

2) 孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗che底。


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