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恒遠生物|生化檢驗中各種空白的概念

更新時間:2024-04-18   點擊次數(shù):1193次

對所謂"試劑空白""樣本空白""水空白""杯空白"等"空白"名詞,下面和大家解釋說明一下:

1、試劑空白:

    由于生化測試測量的吸光度為相對吸光度,所以從理論上來講,所有終點法的測試都需要把試劑本身的吸光度扣除(試劑本身的吸光度就是試劑空白)。在傳統(tǒng)手工法中,每次測定至少做三個管:測定管、標準管、空白管,其中空白管是試劑加蒸餾水,測出來也就是試劑空白。因為操作環(huán)境、儀器狀態(tài)、試劑穩(wěn)定性等變異,所以要求每次都要測定試劑空白,稱為實時試劑空白。

    在全自動分析儀上,大都是模擬手工操作,許多全自動分析儀為追求速度,在設(shè)計上采用折中方法來測定試劑空白。以日立全系列生化儀為例,該系列分析儀做不了實時試劑空白,因為它們?nèi)窍燃訕颖竞蠹釉噭?,為了折中,在定標時做一個試劑空白,保存起來,需要扣除試劑空白時再減這個預(yù)先保存的值。對于日立的這種試劑空白測定很多儀器都采用這種方法,也叫做試劑空白校準。

在自動生化儀上的試劑空白一般表現(xiàn)為零點吸光度,該吸光度是通過校準確立的。

 

2、樣本空白:

由于溶血、脂血、黃疸等情況,會導(dǎo)致樣本本身的吸光度對測試結(jié)果造成影響。所以對樣本本身吸光度的測量,即樣本空白,可以去除這方面的影響,測量方法是按照正常測試的試劑和樣本量,把試劑換成蒸餾水或生理鹽水來進行測量。自動生化儀上,很難界定樣本空白。與消除樣本空白有關(guān)的大約有如下幾點:

    ①在雙試劑測定時,加入試劑和樣品后的吸光度可一定程度上扣除樣本空白。(故有單試劑不能扣除樣本空白的說法)。
    ②現(xiàn)在的試劑抗干擾能力都較強,比如雙試劑,R1加入后先和樣本孵育一段時間,將血紅蛋白、脂肪、膽紅素等反應(yīng)掉,再加入R2開始測定反應(yīng),在一定范圍內(nèi)都可以消除樣本空白。

    ③現(xiàn)代全自動生化儀大多采用雙波長測定,雙波長測定的原則是根據(jù)干擾組分和待測物質(zhì)吸收光譜的峰形特征,選擇兩個波長和,使干擾組分在這兩個波長處的吸光系數(shù)相等,使待測物質(zhì)在兩波長處的吸光系數(shù)有顯著差別。以兩波長分別測定分析溶液的吸光度, 以兩個吸光度值之差(△A)計算。這也可以扣除一部分樣本空白。

    ④有些儀器,例如日立系列,有“血清信息"功能的設(shè)置,做法單獨占用一個空白通道來計算,叫做樣品空白校準。


3、水空白:

    比色杯在加入水以后的吸光度。水空白的意義主要是對光路系統(tǒng)進行檢查和校正,如光源,比色杯等,同時在計算中起到消除“杯差"的作用。日立7060中的Cell Blank(杯空白)測定的就是水空白。

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