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免疫組化中抗體選擇要求

更新時(shí)間:2024-04-26   點(diǎn)擊次數(shù):999次

1、一抗選擇


(1)選擇單克隆還是多克隆抗體。


       由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體,單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一的特異抗原決定簇結(jié)合,就像導(dǎo)-彈精確地命中目標(biāo)一樣。另一方面,即使是同一個(gè)抗原決定簇,在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆來(lái)產(chǎn)生抗體,形成好幾種單克隆抗體混雜物,稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應(yīng)中,一般單克隆抗體特異性強(qiáng),但親和力相對(duì)較小,檢測(cè)抗原靈敏度相對(duì)較低,而多克隆抗體特異性稍弱,但抗體的親和力強(qiáng),靈敏度高,但易出現(xiàn)非特異性染色(可以通過(guò)封閉等避免)。


(2)種屬來(lái)源。


       家兔來(lái)源的抗體多是多克隆,而小鼠來(lái)源的抗體多是單克隆,但也有例外。根據(jù)此來(lái)源選擇相應(yīng)的二抗。


(3)種屬反應(yīng)性的選擇。


       這一點(diǎn)很重要,表明這種抗體可能存在種屬差異,且這種抗體適合檢測(cè)哪種種屬動(dòng)物體內(nèi)的抗原。


(4)能否做免疫組化。


       一抗說(shuō)明書都會(huì)注明做WB、IHC、ICC、IF等,建議選擇注明的抗體(經(jīng)過(guò)文章證明)。


(5)檢測(cè)標(biāo)本類型。


      用于檢測(cè)石蠟切片還是冰凍切片,一般能做石蠟切片的抗體,都可用來(lái)檢測(cè)冰凍切片,但能做冰凍切片的抗體,不一定能檢測(cè)石蠟切片中的抗原。


2、二抗選擇


(1)種屬來(lái)源。


       主要根據(jù)一抗種屬來(lái)源來(lái)決定購(gòu)買二抗來(lái)源,如一抗是小鼠來(lái)源,那二抗就買抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。


(2)標(biāo)記物的選擇。


       有HRP、Biotin、熒光素等標(biāo)記物,一般SP三步法二抗選擇Biotin標(biāo)記為二抗,與后面的SP結(jié)合反應(yīng);而免疫熒光染色就需要購(gòu)買不同熒光素標(biāo)記的二抗,如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。(這主要與后面有無(wú)三抗和三抗種類有關(guān))。


(3)選擇IgM還是IgG。


      一抗是IgM,二抗就選擇IgM;反之,一抗是IgG,則二抗選擇IgG。

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