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噬菌體試驗的基本方法

更新時間:2024-08-12   點擊次數(shù):1390次

(一)噬菌體的分離和純化

 

1 . 噬菌體的分離

   

每份未處理的污水樣品取100mL,混合后,經(jīng)36±1℃培養(yǎng)14~24h,通過孔徑為0.45mm的薄膜濾器,檢查濾液中是否有噬菌體的存在。用斑點試驗法檢查噬菌體。

 

 2 . 單斑純化 

     

根據(jù)斑點試驗法的結(jié)果,估計濾液內(nèi)噬菌體的數(shù)量。將濾液按百倍稀釋法作兩次連續(xù)稀釋。即吸取0.02mL,稀釋在2mL肉湯內(nèi),使成10-2;再吸取此稀釋液0.02mL,稀釋在2mL肉湯內(nèi),使成10-4。

 

(二)PFU和RTD

   

PFU和RTD是噬菌體效價的計量單位。PFU是噬斑形成單位,表示有感染能力的噬菌體數(shù)量,以每毫升內(nèi)的PFU表示(PFU/ml)。RTD是常規(guī)試驗稀釋度,一般以平板上滴加噬菌體的部位剛剛能夠出現(xiàn)或剛剛不能出現(xiàn)完-全融合性裂解(CL)所需要的噬菌體稀釋度。

 

(三)噬菌體的制備

 

繁殖菌:制備噬菌體用的宿主菌稱為繁殖菌,噬菌體的繁殖菌應(yīng)予以凍干保存。

 

噬菌體種: 制備用的噬菌體種應(yīng)經(jīng)三次純化后保存,種子管先作PFU測定。

 

 

(四)裂解譜和裂解模式

    

裂解譜是指一種噬菌體的作用范圍。裂解譜的測定是為了確定該噬菌體在種內(nèi)或?qū)賰?nèi)的廣譜性,在種外或?qū)偻獾慕徊娣磻?yīng)性。

      

裂解模式是指幾種噬菌體組成為配套,各種細菌培養(yǎng)物被幾種噬菌體作用而出現(xiàn)的特殊的反應(yīng)模式,不同的細菌,可呈現(xiàn)不同的反應(yīng)模式。

   

裂解譜和裂解模式應(yīng)使用達到規(guī)定效價的噬菌體進行測定。腸桿菌科診斷用噬菌體一般用原液進行試驗,效價要求在103~105RTD或109~1011PFU/ml之間。分型試驗一般用1 RTD的噬菌體。

 

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