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小鼠促黃體激素檢測說明

更新時間:2012-05-18   點擊次數(shù):1330次

 

小鼠促黃體激素 (LH)酶聯(lián)免疫分析
 
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍:                                                           96T
70pg/ml-2400pg/ml
使用目的:
本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中促黃體激素 (LH)含量。實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠促黃體激素 (LH)水平。用純化的小鼠促黃體激素(LH)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入促黃體激素 (LH),再與 HRP標(biāo)記的促黃體激素 (LH)抗體結(jié)合,形成抗體 -抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。 TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的促黃體激素 (LH)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長下測定吸光度( OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中小鼠促黃體激素 (LH)濃度。試劑盒組成

1
30倍濃縮洗滌液
20ml×1
7
終止液
6ml×1
2
酶標(biāo)試劑
6ml×1
8
標(biāo)準(zhǔn)品( 4800pg/ml
0.5ml×1
3
酶標(biāo)包被板
12孔 × 8
9
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5ml×1
4
樣品稀釋液
6ml×1
10
說明書
1
5
顯色劑 A
6ml×1
11
封板膜
2
6
顯色劑 B
6ml×1/
12
密封袋
1

標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于 -20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的( HRP)活性。操作步驟
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,
然后再加待測樣品 10µl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 3 0分鐘。
4.配液:將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此重復(fù) 5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,空白孔除外。
7.溫育:操作同 3。
8.洗滌:操作同 5
9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻, 37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測定:以空白空調(diào)零, 450nm波長依序測量各孔的吸光度( OD值)。測定應(yīng)在加終止
 

2400pg/ml
5號標(biāo)準(zhǔn)品
150µl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1200pg/ml
4號標(biāo)準(zhǔn)品
150µl5號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
600pg/ml
3號標(biāo)準(zhǔn)品
150µl4號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
300pg/ml
2號標(biāo)準(zhǔn)品
150µl3號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150pg/ml
1號標(biāo)準(zhǔn)品
150µl2號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

液后 15分鐘以內(nèi)進行。操作程序總結(jié):
計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo), OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的 OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。注意事項
 
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)( n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn) .
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。 10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期: 6個月

聯(lián)


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