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Hoechst染色方法實(shí)驗(yàn)步驟

更新時(shí)間:2013-04-15   點(diǎn)擊次數(shù):3419次

Hoechst染色方法

實(shí)驗(yàn)步驟
1.貼壁細(xì)胞

 

1) 取普通潔凈蓋玻片于70%乙醇中浸泡5分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間,無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)吹干或用細(xì)胞培養(yǎng)PBS或0.9%NaCl等溶液洗滌三遍,再用細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌一遍。將蓋玻片置于六孔板內(nèi),種入細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)夜,使約為50%-80%滿(mǎn)。

2) 刺激細(xì)胞發(fā)生凋亡后,吸盡培養(yǎng)液,加入0.5ml固定液,固定10分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間(可4℃過(guò)夜)。

3) 去固定液,用PBS或0.9%NaCl洗兩遍,每次3分鐘,吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床,或手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。

4) 加入0.5ml Hoechst 33258染色液,染色5分鐘。也宜用搖床,或手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。

5) 用PBS或0.9%NaCl洗兩遍,每次3分鐘。

6) 滴一滴抗熒光淬滅封片液于載玻片上,蓋上貼有細(xì)胞的蓋玻片,盡量避免氣泡。使細(xì)胞接觸封片液,切勿弄反。

7) 熒光顯微鏡可檢測(cè)到呈藍(lán)色的細(xì)胞核。

 

2. 懸浮細(xì)胞

1) 離心收集細(xì)胞樣品于1.5ml離心管內(nèi),加入0.5ml固定液,緩緩懸起細(xì)胞,固定10分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間(可4℃過(guò)夜)。

2) 離心去固定液,用PBS或0.9%NaCl洗兩遍,每次3分鐘。洗滌期間手動(dòng)晃動(dòng)。

3) zui后一次離心后吸去大部分液體保留約50ml液體,再緩緩懸起細(xì)胞,滴加至載玻片上,盡量使細(xì)胞分布均勻。

4) 稍晾干,使細(xì)胞貼在載玻片上不易隨液體流動(dòng)。

5) 均勻滴上0.5ml Hoechst 33258染色液,染色5分鐘。用吸水紙從邊緣吸去液體,微晾干。

6) 用PBS或0.9%NaCl洗兩遍,每次3分鐘。

7) 滴一滴抗熒光淬滅封片液于載玻片上,蓋上一潔凈的蓋玻片,盡量避免氣泡。

8) H. 熒光顯微鏡可檢測(cè)到呈藍(lán)色的細(xì)胞核。

 

3. 組織切片

1) 常規(guī)包埋切片后,脫蠟,透明。

2) PBS或0.9%NaCl洗兩遍,每次3分鐘,吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床,或手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。可在六孔板中操作。

3) 加入0.5ml Hoechst 33258染色液,染色5分鐘。也宜用搖床,或手動(dòng)晃動(dòng)。

4) 用PBS或0.9%NaCl洗兩遍,每次3分鐘。

5) 將切片置于載玻片上,滴一滴抗淬滅封片液,蓋上一潔凈的蓋玻片,盡量避免氣泡。

6) 熒光顯微鏡可檢測(cè)到呈藍(lán)色的細(xì)胞核。

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