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如何在免疫組化中處理弱陽性的問題

更新時(shí)間:2016-01-27   點(diǎn)擊次數(shù):2135次

如何在免疫組化中處理弱陽性的問題

如果陰性對照沒有染色而陽性對照標(biāo)本弱陽性,除了考慮上述因素外,還應(yīng)考慮:

① 標(biāo)本的固定方式,不當(dāng)?shù)墓潭ǚ绞交蚬潭〞r(shí)溫度過高,都會影響到所檢測的抗原的數(shù)量和質(zhì)量。

② 不適當(dāng)?shù)目乖迯?fù)方式,由于石蠟切片在制作的過程中固定劑對抗原的封閉作用,必須用抗原熱修復(fù)或酶消化或兩種同時(shí)使用的抗原雙暴露法,至于使用哪一種方法,應(yīng)參照生產(chǎn)廠家的說明,同時(shí)結(jié)合標(biāo)本的具體情況而定。

③ 抗體的稀釋度是否過高或者孵育的溫度/時(shí)間是否正確。一般試劑生產(chǎn)廠家都會對試劑給出一定的使用范圍,但是由于使用者的標(biāo)本來自各種組織,處理過程也不盡相同,所以應(yīng)參照使用范圍,對所使用的一抗進(jìn)行梯度測試,找出*的使用濃度。

④ 切片上了過多的沖洗液,當(dāng)抗體加至切片上時(shí),等于人為地對抗體進(jìn)行了進(jìn)一步的稀釋。

⑤ 孵育時(shí)切片是否放置水平,否則會導(dǎo)致抗體流失。

  如果陰性對照沒有反應(yīng),陽性對照反應(yīng)良好,而標(biāo)本弱陽性,則可能是由于陽性對照不是同一種組織、或固定方式不同等原因所致。

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